细菌易位标志物作为急性肠梗阻感染性和炎症性并发症的预测因子
细菌易位标志物作为急性机械性肠梗阻感染性和炎症性并发症预测因子的预后意义
尽管有现代诊断和治疗急性肠梗阻 (ABO) 的方法,但术后死亡率在 5% 到 32% 之间,并发症发生率高达 23%。 ABO 最可怕的感染和炎症并发症之一是败血症。 ABO 败血症发展的主要组成部分是细菌易位 (BT)。 BT是肠道细菌或其产物通过肠粘膜进入肠系膜淋巴结并进一步进入正常无菌组织和器官的迁移。
今天有几种检测BT的方法:
- 直接法——检测肠系膜淋巴结 (MLN) 中的 16s rRNA(核糖体核糖核酸);
- 间接法——检测血清脂多糖结合蛋白(LBP)和presepsin(可溶性CD14亚型或sCD14-ST)。
本研究的目的是通过评估体循环中生物标志物(LBP、sCD14-ST)与肠系膜淋巴结中微生物基因(16s rRNA)的检测。
研究概览
详细说明
对于感染性和炎症性并发症的早期诊断,有必要研究 LBP、sCD-14 和 16sRNA 作为细菌易位标志物在恶性和良性急性肠梗阻患者以及计划接受结肠肿瘤手术干预后的患者中的应用。 根据血清中细菌易位生物标志物的变化,建议可以根据发生感染和炎症并发症的风险水平对进行病理学研究的患者进行分层。
研究材料是血清和肠系膜淋巴结 (MLN)。 静脉采血将在手术前 1 小时、手术后 24 和 72 小时进行。 将静脉血收集在带有凝血激活剂和血清凝胶分离器的 5 ml 真空采血管中。 将以 1000 x g 离心 20 分钟,之后凝胶将血清与凝块完全分离,形成紧密的屏障。用于脂多糖结合蛋白(LBP,人)和 Presepsin(sCD14-ST,人)的 ELISA 试剂盒, Cloud-Clone Corp. 的产品将用于确定是否存在 LBP 和 sCD14-ST。 将根据制造商对 BioRad 的 ELISA EVOLIS 机器人系统的说明进行分析。
在手术期间从大体标本的肠系膜切除肠道后,手术外科医生将在无菌条件下进行 MLN 取样。 MLN 将被放置在没有任何填充物的无菌管中。 DNA将使用美国Thermo Fisher Scientific公司生产的GeneJET Genomic DNA Purification Kit按照制造商的说明进行提取。 MLN 中的 16s rRNA 细菌将通过使用实时 PCR 和 BIO-RAD CFX96 放大器以及 16s rRNA 正向和反向引物(U16SRT-F FACTCCTACGGGAGGGAGGCAGGT 和 U16SRT-R TATTACCGCGGCTGCTGGGC)进行检测。
在实施过程中,将使用研究中心非营利股份公司(NJSC)“卡拉干达医科大学”的集体使用实验室的资源。
本研究由哈萨克斯坦共和国教育和科学部科学委员会资助(授权号 AP09260597)。
研究类型
注册 (实际的)
联系人和位置
学习地点
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Karaganda、哈萨克斯坦、100000
- NJSC Karaganda Medical University
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参与标准
资格标准
适合学习的年龄
接受健康志愿者
取样方法
研究人群
描述
纳入标准:
- 恶性急性肠梗阻患者,
- 良性急性肠梗阻患者,
- 无急性肠梗阻的结直肠癌患者(计划手术)。
排除标准:
- 18岁以下,
- 怀孕,
- 麻痹性急性肠梗阻患者,
- HIV感染者、肝硬化患者、
- 由于另一种病理而导致感染过程的患者。
学习计划
研究是如何设计的?
设计细节
队列和干预
团体/队列 |
干预/治疗 |
|---|---|
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恶性ABO
恶性急性肠梗阻60例
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在手术前 1 小时、手术后 24 小时和 72 小时通过 ELISA 方法确定血清中是否存在 LBP。
在手术前 1 小时、手术后 24 和 72 小时通过 ELISA 方法确定血清中是否存在 sCD14-ST。
通过 PCR 方法确定肠系膜淋巴结中是否存在 16s rRNA。
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无 ABO 的 CRC(对照)
无急性肠梗阻的大肠癌患者60例(计划手术)
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在手术前 1 小时、手术后 24 小时和 72 小时通过 ELISA 方法确定血清中是否存在 LBP。
在手术前 1 小时、手术后 24 和 72 小时通过 ELISA 方法确定血清中是否存在 sCD14-ST。
通过 PCR 方法确定肠系膜淋巴结中是否存在 16s rRNA。
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良性ABO
良性急性肠梗阻30例
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在手术前 1 小时、手术后 24 小时和 72 小时通过 ELISA 方法确定血清中是否存在 LBP。
在手术前 1 小时、手术后 24 和 72 小时通过 ELISA 方法确定血清中是否存在 sCD14-ST。
通过 PCR 方法确定肠系膜淋巴结中是否存在 16s rRNA。
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研究衡量的是什么?
主要结果指标
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
|---|---|---|
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患有术后感染和炎症并发症的参与者人数变化
大体时间:一次(如果住院期间出现任何并发症 - 7至28天)
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术后有无感染性、炎症性并发症(伤口化脓、吻合口瘘、腹腔脓肿、腹膜炎、败血症等)
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一次(如果住院期间出现任何并发症 - 7至28天)
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次要结果测量
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
|---|---|---|
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血清中 LBP 水平
大体时间:术前1小时、术后72小时
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将动态比较组/亚组之间以及每个组/亚组内的 LBP 水平。
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术前1小时、术后72小时
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血清中 sCD14-ST 水平
大体时间:术前1小时、术后72小时
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将动态比较各组/亚组之间以及每个组/亚组内的 sCD14-ST 水平。
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术前1小时、术后72小时
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肠系膜淋巴结中的 16s rRNA
大体时间:一次(手术期间在无菌条件下进行 MLN 采样)
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将在组/亚组之间比较肠系膜淋巴结中是否存在 16s rRNA。
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一次(手术期间在无菌条件下进行 MLN 采样)
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合作者和调查者
调查人员
- 学习椅:Yemek Turgunov, Pr.、NJSC Karaganda Medical University
- 首席研究员:Alina Ogizbayeva, PhD student、NJSC Karaganda Medical University
- 首席研究员:Lyudmila Akhmaltdinova, PhD、NJSC Karaganda Medical University
- 首席研究员:Kairat Shakeyev, Pr.、NJSC Karaganda Medical University
- 首席研究员:Dmitry Matyushko, PhD、Multidisciplinary hospital No. 1 of Karaganda
- 首席研究员:Miras Mugazov, PhD、NJSC Karaganda Medical University
- 首席研究员:Asylbek Zhumakaev, Master、Multidisciplinary hospital No. 3 of Karaganda
- 首席研究员:Irina Kadyrova, PhD、NJSC Karaganda Medical University
出版物和有用的链接
一般刊物
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有用的网址
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- Masson S, Caironi P, Fanizza C, Thomae R, Bernasconi R, Noto A, Oggioni R, Pasetti GS, Romero M, Tognoni G, Latini R, Gattinoni L. Circulating presepsin (soluble CD14 subtype) as a marker of host response in patients with severe sepsis or septic shock
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