In vivo hodnocení farmakodynamiky histaminu

Celkovým cílem tohoto výzkumu je vyvinout a ověřit neinvazivní přístupy vhodné pro použití v pediatrii, které jsou dostatečné k přímému hodnocení genotypově-fenotypových asociací jako determinantů profilu koncentrace-účinek léků schopných měnit mikrovaskulární funkce. Konkrétním cílem tohoto projektu bude posoudit, zda mikrovaskulární průtok krve stanovený dříve ověřenou laserovou dopplerovskou technikou může být použit jako spolehlivý náhradní koncový bod schopný funkčně rozlišit účinky polymorfismů v genech, které jsou kvantitativně důležité pro biotransformaci histaminu. Výzkumníci předpokládají, že rychlost mikrovaskulárního průtoku krve může být použita jako platný náhradní marker k rozlišení funkčních důsledků alelických variant v enzymech primárně odpovědných za biotransformaci histaminu.

Projekt obsahuje dvě části:

1. Validace histaminové iontoforézy (s měřením mikrovaskulárního průtoku krve laserovou Dopplerovou flowimetrií) v dětské kohortě jako farmakologický provokační test schopný spolehlivě charakterizovat normální fyziologickou odpověď kožní mikrovaskulatury na toto xenobiotikum, které se zabývala studiem u 50 dětí s diagnózou alergického onemocnění nebo jiných „alergických“ stavů, kdy léčba antihistaminiky představuje lékařský „standard péče“. Subjekty budou souběžně (na kontralaterálních končetinách) dostávat stimulaci histaminem kožním prick testem „zlatého standardu“ (časově závislá odezva hodnocená sériovým hodnocením reakcí puchýře a vzplanutí) a dříve popsanou technikou iontoforézy (časově závislá odezva sériovým hodnocením mikrovaskulárních průtok krve pomocí validované laserové Dopplerovy techniky). Kromě toho bude z těchto subjektů izolována DNA pro genotypizaci, jak je popsáno v části 2).
2. Hodnocení mikrovaskulární odpovědi na expozici histaminu jako náhradního markeru schopného funkčně rozlišit asociace genotyp-fenotyp pro polymorfně exprimované geny, které jsou kvantitativně důležité při regulaci biotransformace a farmakologické inaktivace histaminu, řešeno nejprve genotypizací 150 dalších subjektů, které mají stanovenou diagnózu alergie. onemocnění, kde léčba antihistaminiky představuje lékařský „standard péče“. Genotypová data pro kandidátní geny primárního zájmu, histamin-N-methyltransferázu (HNMT) a diaminoxidázu (DAO), tak budou k dispozici od celkem 200 subjektů. Na základě známých asociací genotyp-fenotyp pro HNMT (enzym primárně odpovědný za biotransformaci histaminu) budou vybrány dvě kohorty subjektů z těch, které byly studovány za použití extrémně nesouhlasného fenotypového přístupu: subjekty, u kterých se na základě genotypu předpokládá snížená aktivita HMNT (tj. jedinci s 1 nebo 0 funkčními alelami) a subjekty, u kterých se předpokládá, že mají normální enzymovou aktivitu (tj. ti, kteří mají dvě funkční alely). Tito účastníci studie pak dostanou transkutánní expozici histaminu pomocí iontoforézy, po které bude následovat opakované hodnocení mikrovaskulární reaktivity vyjádřené časově zprůměrovaným měřením rychlosti průtoku krve pomocí zavedené laserové Dopplerovy techniky. Statistická analýza rychlosti průtoku krve a dalších parametrů z laserového dopplerovského hodnocení bude použita jako primární výstupní měření pro srovnání dvou kohort studie s ohledem na expresi HNMT a DAO a jejich funkční důsledky, s využitím histaminové odpovědi jako náhradního hodnocení fenotypu.