Ocena in vivo farmakodynamiki histaminy

Ogólnym celem tych badań jest opracowanie i walidacja nieinwazyjnych podejść odpowiednich do stosowania w pediatrii, które są wystarczające do bezpośredniej oceny powiązań genotyp-fenotyp jako determinantów profilu stężenia i efektu leków zdolnych do zmiany funkcji mikrokrążenia. Konkretnym celem tego projektu będzie ocena, czy przepływ krwi w mikrokrążeniu określony za pomocą wcześniej zwalidowanej techniki laserowego Dopplera może być użyty jako wiarygodny zastępczy punkt końcowy zdolny do funkcjonalnego rozróżnienia efektów polimorfizmów w genach, które są ilościowo ważne dla biotransformacji histaminy. Badacze postawili hipotezę, że prędkość przepływu krwi w mikronaczyniach może być wykorzystana jako ważny marker zastępczy do rozróżnienia funkcjonalnych konsekwencji wariantów alleli w enzymach odpowiedzialnych głównie za biotransformację histaminy.

Projekt obejmuje dwie części:

1. Walidacja jonoforezy histaminowej (z pomiarem przepływu krwi w mikrokrążeniu za pomocą laserowej przepływometrii Dopplera) w kohorcie pediatrycznej jako farmakologicznego testu prowokacyjnego zdolnego do wiarygodnego scharakteryzowania normalnej fizjologicznej odpowiedzi mikrokrążenia skórnego na ten ksenobiotyk w badaniu z udziałem 50 dzieci z rozpoznaniem choroby alergicznej lub innych stanów „alergicznych”, w przypadku których leczenie lekami przeciwhistaminowymi stanowi medyczny „standard opieki”. Pacjenci będą jednocześnie (na przeciwległych kończynach) otrzymywali prowokację histaminą za pomocą punktowego testu skórnego „złotego standardu” (odpowiedź zależna od czasu oceniana na podstawie seryjnej oceny bąbla i reakcji zaczerwienienia) oraz za pomocą wcześniej opisanej techniki jonoforezy (odpowiedź zależna od czasu na podstawie seryjnej oceny mikrokrążenia przepływu krwi przy użyciu zatwierdzonej laserowej techniki Dopplera). Ponadto od tych osób zostanie wyizolowane DNA w celu genotypowania, jak opisano w części 2).
2. Ocena odpowiedzi mikronaczyniowej na prowokację histaminą jako zastępczego markera zdolnego do funkcjonalnego rozróżniania powiązań genotyp-fenotyp dla polimorficznie eksprymowanych genów, które są ilościowo ważne w regulacji biotransformacji i farmakologicznej inaktywacji histaminy, do której skierowano najpierw genotypowanie 150 dodatkowych pacjentów, którzy mają ustaloną diagnozę alergii choroba, w przypadku której leczenie lekami przeciwhistaminowymi stanowi medyczny „standard opieki”. Dane genotypowe dla genów kandydujących będących przedmiotem zainteresowania, N-metylotransferazy histaminowej (HNMT) i oksydazy diaminowej (DAO), będą zatem dostępne od łącznie 200 osób. Na podstawie znanych powiązań genotyp-fenotyp dla HNMT (enzymu odpowiedzialnego głównie za biotransformację histaminy), dwie kohorty osobników zostaną wybrane spośród tych badanych przy użyciu skrajnie niezgodnego podejścia fenotypowego: osobniki, u których przewiduje się, na podstawie genotypu, zmniejszoną aktywność HMNT (tj. , te z 1 lub 0 funkcjonalnymi allelami) i osoby, u których przewiduje się, że mają normalną aktywność enzymatyczną (tj. te z dwoma funkcjonalnymi allelami). Ci uczestnicy badania otrzymają następnie przezskórną prowokację histaminą przez jonoforezę, po której nastąpi powtórna ocena reaktywności mikrokrążenia odzwierciedlona przez uśredniony w czasie pomiar prędkości przepływu krwi przy użyciu uznanej techniki laserowego Dopplera. Analiza statystyczna prędkości przepływu krwi i innych parametrów z laserowej oceny Dopplera zostanie wykorzystana jako główny wynik pomiaru do porównania dwóch kohort badawczych pod względem ekspresji HNMT i DAO oraz ich funkcjonalnych konsekwencji, przy użyciu odpowiedzi histaminowej jako oceny zastępczej fenotypu.