In vivo bedömning av histaminfarmakodynamik

Det övergripande målet med denna forskning är att utveckla och validera icke-invasiva metoder som är lämpliga för användning inom pediatrik som är tillräckliga för att direkt utvärdera genotyp-fenotypassociationer som bestämningsfaktorer för koncentration-effektprofilen för läkemedel som kan förändra mikrovaskulär funktion. Det specifika målet för detta projekt kommer att vara att bedöma om mikrovaskulärt blodflöde bestämt med en tidigare validerad laser-dopplerteknik kan användas som en pålitlig surrogat-endpoint som funktionellt kan urskilja effekterna av polymorfismer i generna som är kvantitativt viktiga för histaminbiotransformation. Utredarna antar att mikrovaskulär blodflödeshastighet kan användas som en giltig surrogatmarkör för att urskilja de funktionella konsekvenserna av allelvarianter i de enzymer som primärt ansvarar för biotransformationen av histamin.

Projektet omfattar två delar:

1. Validering av histaminjontofores (med mätning av mikrovaskulärt blodflöde med laserdopplerflödesmetri) i en pediatrisk kohort som ett farmakologiskt provokationstest som på ett tillförlitligt sätt kan karakterisera det normala fysiologiska svaret av den kutana mikrovaskulaturen på denna främlingsfientliga substans som behandlas av en studie på 50 barn med en diagnos av allergisk sjukdom eller andra "allergiska" tillstånd där behandling med antihistaminer representerar den medicinska "vårdstandarden". Försökspersoner kommer samtidigt (på kontralaterala extremiteter) att få histaminutmaning genom "gold standard" kutant pricktest (tidsberoende respons bedömd genom seriell bedömning av wheal- och flare-reaktioner) och genom en tidigare beskriven jontoforesteknik (tidsberoende respons genom seriell bedömning av mikrovaskulära reaktioner) blodflöde med hjälp av en validerad laser-dopplerteknik). Dessutom kommer DNA att isoleras från dessa försökspersoner för genotypning enligt beskrivning i del 2).
2. Bedömning av mikrovaskulär respons på histaminutmaning som en surrogatmarkör med förmåga att funktionellt särskilja genotyp-fenotypassociationer för polymorft uttryckta gener som är kvantitativt viktiga för att reglera biotransformationen och farmakologisk inaktivering av histamin som först behandlas genom att genotypa 150 ytterligare försökspersoner som har en etablerad diagnos av allergiska sjukdom där behandling med antihistaminer representerar den medicinska "vårdstandarden". Genotypdata för kandidatgener av primärt intresse, histamin-N-metyltransferas (HNMT) och diaminoxidas (DAO), kommer således att finnas tillgängliga från totalt 200 försökspersoner. Baserat på kända genotyp-fenotypassociationer för HNMT (enzymet som primärt är ansvarigt för histaminbiotransformation), kommer två kohorter av försökspersoner att väljas från de som studerats med användning av en extrem disharmonisk fenotypmetod: försökspersoner som, baserat på genotyp, förutsägs ha reducerad HMNT-aktivitet (dvs. de med 1 eller 0 funktionella alleler) och försökspersoner som förutspås ha normal enzymaktivitet (dvs de med två funktionella alleler). Dessa studiedeltagare kommer sedan att få en transkutan histaminutmaning levererad genom jontofores, följt av upprepad bedömning av mikrovaskulär reaktivitet som återspeglas av tidsgenomsnittlig mätning av blodflödeshastigheten med hjälp av en etablerad laser-dopplerteknik. Statistisk analys av blodflödeshastighet och andra parametrar från laserdopplerbedömningen kommer att användas som det primära resultatmätningen för jämförelse av de två studiekohorterna med avseende på uttryck av HNMT och DAO och de funktionella konsekvenserna därav, med histaminsvar som surrogatbedömning av fenotyp.