Valutazione in vivo della farmacodinamica dell'istamina

L'obiettivo generale di questa ricerca è quello di sviluppare e validare approcci non invasivi adatti all'uso in pediatria che siano sufficienti per valutare direttamente le associazioni genotipo-fenotipo come determinanti del profilo concentrazione-effetto di farmaci in grado di alterare la funzione microvascolare. L'obiettivo specifico di questo progetto sarà valutare se il flusso sanguigno microvascolare determinato da una tecnica laser Doppler precedentemente validata possa essere utilizzato come endpoint surrogato affidabile in grado di discriminare funzionalmente gli effetti dei polimorfismi nei geni che sono quantitativamente importanti per la biotrasformazione dell'istamina. I ricercatori ipotizzano che la velocità del flusso sanguigno microvascolare possa essere utilizzata come un valido marker surrogato per discriminare le conseguenze funzionali delle varianti alleliche negli enzimi principalmente responsabili della biotrasformazione dell'istamina.

Il progetto comprende due parti:

1. Validazione della iontoforesi dell'istamina (con misurazione del flusso sanguigno microvascolare mediante flussimetria laser Doppler) in una coorte pediatrica come test di provocazione farmacologica in grado di caratterizzare in modo affidabile la normale risposta fisiologica del microcircolo cutaneo a questo xenobiotico affrontato da uno studio su 50 bambini con una diagnosi di malattie allergiche o altre condizioni "allergiche" in cui il trattamento con antistaminici rappresenta lo "standard di cura" medico. I soggetti riceveranno in concomitanza (sulle estremità controlaterali) test di istamina mediante il prick test cutaneo "gold standard" (risposta dipendente dal tempo valutata mediante valutazione seriale delle reazioni di pomfi e riacutizzazioni) e da una tecnica di ionoforesi precedentemente descritta (risposta dipendente dal tempo mediante valutazione seriale delle reazioni microvascolari flusso sanguigno utilizzando una tecnica laser Doppler validata). Inoltre, il DNA sarà isolato da questi soggetti per la genotipizzazione come descritto nella parte 2).
2. Valutazione della risposta microvascolare alla sfida dell'istamina come marcatore surrogato in grado di discriminare funzionalmente le associazioni genotipo-fenotipo per i geni polimorficamente espressi che sono quantitativamente importanti nella regolazione della biotrasformazione e dell'inattivazione farmacologica dell'istamina affrontata in primo luogo mediante la genotipizzazione di 150 soggetti aggiuntivi con diagnosi accertata di allergia malattia in cui il trattamento con antistaminici rappresenta lo "standard di cura" medico. I dati genotipici per i geni candidati di interesse primario, istamina-N-metiltransferasi (HNMT) e diammina ossidasi (DAO), saranno quindi disponibili da un totale di 200 soggetti. Sulla base delle associazioni note genotipo-fenotipo per l'HNMT (l'enzima principalmente responsabile della biotrasformazione dell'istamina), verranno selezionate due coorti di soggetti tra quelli studiati utilizzando un approccio fenotipico estremamente discordante: soggetti che prevedevano, in base al genotipo, una ridotta attività dell'HMNT (es. , quelli con 1 o 0 alleli funzionali) e soggetti con attività enzimatica normale (cioè quelli con due alleli funzionali). Questi partecipanti allo studio riceveranno quindi una sfida transcutanea di istamina erogata dalla ionoforesi, seguita da una valutazione ripetuta della reattività microvascolare riflessa dalla misurazione media nel tempo della velocità del flusso sanguigno utilizzando una tecnica laser Doppler consolidata. L'analisi statistica della velocità del flusso sanguigno e altri parametri della valutazione laser Doppler saranno utilizzati come misurazione dell'esito primario per il confronto delle due coorti di studio rispetto all'espressione di HNMT e DAO e le relative conseguenze funzionali, utilizzando la risposta dell'istamina come valutazione surrogata di fenotipo.