Evaluación in vivo de la farmacodinámica de la histamina

El objetivo general de esta investigación es desarrollar y validar enfoques no invasivos adecuados para su uso en pediatría que sean suficientes para evaluar directamente las asociaciones genotipo-fenotipo como determinantes del perfil concentración-efecto de fármacos capaces de alterar la función microvascular. El objetivo específico de este proyecto será evaluar si el flujo sanguíneo microvascular determinado por una técnica de láser Doppler previamente validada se puede utilizar como un criterio de valoración sustituto fiable capaz de discriminar funcionalmente los efectos de los polimorfismos en los genes que son cuantitativamente importantes para la biotransformación de la histamina. Los investigadores plantean la hipótesis de que la velocidad del flujo sanguíneo microvascular se puede utilizar como marcador sustituto válido para discriminar las consecuencias funcionales de las variantes alélicas en las enzimas principalmente responsables de la biotransformación de la histamina.

El proyecto incluye dos partes:

1. Validación de la iontoforesis con histamina (con medición del flujo sanguíneo microvascular por flujometría láser Doppler) en una cohorte pediátrica como prueba de provocación farmacológica capaz de caracterizar de forma fiable la respuesta fisiológica normal de la microvasculatura cutánea a este xenobiótico abordada por un estudio en 50 niños con diagnóstico de enfermedad alérgica u otras condiciones "alérgicas" donde el tratamiento con antihistamínicos representa el "estándar de atención" médica. Los sujetos recibirán concomitantemente (en las extremidades contralaterales) provocaciones con histamina mediante la prueba de punción cutánea "estándar de oro" (respuesta dependiente del tiempo evaluada mediante la evaluación en serie de las reacciones de roncha y eritema) y mediante una técnica de iontoforesis descrita previamente (respuesta dependiente del tiempo mediante la evaluación en serie de las reacciones microvasculares). el flujo sanguíneo utilizando una técnica Doppler láser validada). Además, se aislará el ADN de estos sujetos para el genotipado como se describe en la parte 2).
2. Evaluación de la respuesta microvascular a la provocación con histamina como marcador sustituto capaz de discriminar funcionalmente asociaciones genotipo-fenotipo para genes expresados ​​polimórficamente que son cuantitativamente importantes en la regulación de la biotransformación y la inactivación farmacológica de la histamina abordada primero mediante la genotipificación de 150 sujetos adicionales que tienen un diagnóstico establecido de alergia enfermedad en la que el tratamiento con antihistamínicos representa el "estándar de atención" médica. Los datos de genotipo para genes candidatos de interés principal, histamina-N-metiltransferasa (HNMT) y diamino oxidasa (DAO), estarán disponibles de un total de 200 sujetos. Con base en las asociaciones genotipo-fenotipo conocidas para HNMT (la enzima principalmente responsable de la biotransformación de la histamina), se seleccionarán dos cohortes de sujetos de los estudiados utilizando un enfoque de fenotipo discordante extremo: sujetos predichos, según el genotipo, que tendrán una actividad reducida de HMNT (es decir, , aquellos con 1 o 0 alelos funcionales) y sujetos con una actividad enzimática normal prevista (es decir, aquellos con dos alelos funcionales). Estos participantes del estudio luego recibirán un desafío transcutáneo con histamina administrado por iontoforesis, seguido de una evaluación repetida de la reactividad microvascular reflejada por la medición promediada en el tiempo de la velocidad del flujo sanguíneo utilizando una técnica establecida de láser Doppler. El análisis estadístico de la velocidad del flujo sanguíneo y otros parámetros de la evaluación con láser Doppler se utilizará como medida de resultado principal para comparar las dos cohortes del estudio con respecto a la expresión de HNMT y DAO y las consecuencias funcionales de las mismas, utilizando la respuesta de histamina como evaluación sustituta. de fenotipo.