Avaliação in vivo da farmacodinâmica da histamina

O objetivo geral desta pesquisa é desenvolver e validar abordagens não invasivas adequadas para uso em pediatria que sejam suficientes para avaliar diretamente as associações genótipo-fenótipo como determinantes do perfil concentração-efeito de drogas capazes de alterar a função microvascular. O objetivo específico deste projeto será avaliar se o fluxo sanguíneo microvascular determinado por uma técnica de laser Doppler previamente validada pode ser usado como um endpoint substituto confiável capaz de discriminar funcionalmente os efeitos de polimorfismos nos genes que são quantitativamente importantes para a biotransformação da histamina. Os investigadores levantam a hipótese de que a velocidade do fluxo sanguíneo microvascular pode ser usada como um marcador substituto válido para discriminar as consequências funcionais de variantes alélicas nas enzimas responsáveis ​​principalmente pela biotransformação da histamina.

O projeto inclui duas partes:

1. Validação da iontoforese de histamina (com medição do fluxo sanguíneo microvascular por fluxometria Doppler a laser) em uma coorte pediátrica como teste de provocação farmacológica capaz de caracterizar de forma confiável a resposta fisiológica normal da microvasculatura cutânea a esse xenobiótico abordada por um estudo em 50 crianças com diagnóstico de doença alérgica ou outras condições "alérgicas" em que o tratamento com anti-histamínicos representa o "padrão de tratamento" médico. Os indivíduos receberão concomitantemente (em extremidades contralaterais) desafios com histamina pelo teste cutâneo "padrão ouro" (resposta dependente do tempo avaliada por avaliação seriada de reações de pápula e exacerbação) e por uma técnica de iontoforese previamente descrita (resposta dependente do tempo por avaliação seriada de microvascularização fluxo sanguíneo usando uma técnica validada de laser Doppler). Além disso, o DNA será isolado desses indivíduos para genotipagem, conforme descrito na parte 2).
2. Avaliação da resposta microvascular ao desafio com histamina como um marcador substituto capaz de discriminar funcionalmente associações genótipo-fenótipo para genes polimorficamente expressos que são quantitativamente importantes na regulação da biotransformação e inativação farmacológica da histamina abordada primeiro pela genotipagem de 150 indivíduos adicionais que têm um diagnóstico estabelecido de alergia doença em que o tratamento com anti-histamínicos representa o "padrão de tratamento" médico. Dados de genótipos para genes candidatos de interesse primário, histamina-N-metiltransferase (HNMT) e diamina oxidase (DAO), estarão disponíveis de um total de 200 indivíduos. Com base em associações conhecidas de genótipo-fenótipo para HNMT (a enzima principal responsável pela biotransformação da histamina), duas coortes de indivíduos serão selecionadas dentre aquelas estudadas usando uma abordagem de fenótipo discordante extremo: indivíduos previstos, com base no genótipo, para ter atividade de HMNT reduzida (ou seja, , aqueles com 1 ou 0 alelos funcionais) e sujeitos previstos para ter atividade enzimática normal (ou seja, aqueles com dois alelos funcionais). Esses participantes do estudo receberão então um desafio transcutâneo com histamina administrado por iontoforese, seguido de avaliação repetida da reatividade microvascular refletida pela medição da média de tempo da velocidade do fluxo sanguíneo usando uma técnica estabelecida de laser Doppler. A análise estatística da velocidade do fluxo sanguíneo e outros parâmetros da avaliação Doppler a laser será usada como medida de resultado primário para comparação das duas coortes de estudo com relação à expressão de HNMT e DAO e suas consequências funcionais, usando a resposta de histamina como avaliação substituta de fenótipo.