Inovativní biomarkery u Alzheimerovy choroby a frontotemporální demence (FTD): Preventivní a personalizované

Hodnocení biomarkerů u Alzheimerovy choroby a frontotemporální demence

1. Specifické cíle

   Abychom posílili pole rozpoznávání biomarkerů a usnadnili preventivní a personalizovanou medicínu, klademe si nyní následující otázku, zda má izraelská populace pacientů podobný profil plazmatických proteinů, jaký byl popsán dříve pro jiné populace (Marksteiner et al., 2011).

   Studie budou prováděny kvantifikací transkriptů RNA, kvantitativní polymerázovou řetězovou reakcí v reálném čase (krevní buňky a CSF) a imunochemickou detekcí na úrovni proteinů (CSF a sérum).

2. Metody:

Lymfocyty:

Lidské lymfocyty se izolují z 10 ml žilní krve metodou Ficoll Paque (de Rock a Taylor 1977; McCauley a Hartmann, 1982), pro extrakci RNA a stanovení budeme postupovat podle metod popsaných v našich rukopisech (Dresner et al. , 2011).

Krevní plazma a sérum budou připraveny tak, jak je uvedeno na www.peoimmune.com. Kvantifikace proteinů bude provedena pomocí Tri reagentu (Sigma), které umožňuje současnou přípravu souprav pro imunodepleci proteinů a plazmy a albuminu od společnosti Sigma.

Kvantifikace proteinů: bude provedena na buněčných proteinech a také na plazmatických proteinech elektroforézou na SDS-polyakrylamidovém gelu s následnou analýzou western.

Vzorky mozkomíšního moku budou odebírány pomocí páteřní jehly zavedené do vertebrálního prostoru L4-L5 nebo L3-L4 se subjektem v laterální poloze dekubitu. Jeden ml CSF získaného od každého pacienta bude okamžitě ponořen do ledu s následným udržováním při -70 °C (nebo v suchém ledu během přepravy) až do doby testu. Polovina ml každého vzorku CSF se zahustí lyofilizací v zařízení Speed-Vac (Holten, Gydevang, Dánsko) na přibližně 0,1 ml. Imunobloting proteinu CSF bude proveden za použití podobné metodologie, jaká je popsána výše [a viz také (Kozlovsky et al., 2004)]. Proteinová exprese bude analyzována pomocí western blotů (Shiryaev et al., 2010).

Počet pacientů:

Odhadujeme, že bude zahrnuto asi 30 pacientů s Alzheimerovou chorobou, 20 pacientů s frontotemporální demencí a 20 kontrol.

Profesor Aharon-Peretz vyhodnotí pacienty s podezřením na Alzheimerovu chorobu a frontotemporální demenci a zahrne pacienty v různých stádiích onemocnění stratifikovaným způsobem (mírné, středně těžké a těžké). Všichni pacienti budou mít podepsaný informovaný souhlas v souladu s Helsinskými pokyny. Klinické hodnocení bude zahrnovat: fyzikální a neurologické hodnocení. Všichni pacienti budou vyzváni k darování 50 ml krve a vybraní pacienti podstoupí lumbální punkci. Lumbální punkce bude provedena s neurologickým vyšetřením. Profesor Gozes bude koordinovat vědecký aspekt studie.

Koordinátoři studia:

Vědecký pracovník: profesor Illana Gozes, PhD, katedra Lily a Avraham Gildor pro výzkum růstových faktorů; Ředitel, The Adams Super Center for Brain Studies, Tel Aviv University: igozes@post.tau.ac.il Klinický materiál: Profesorka Judith Aharon-Peretz, MD, vedoucí „jednotky kognitivní neurologie“ Rambam Rambam-Health Care Campus, Haifa, Izrael