Biomarcadores innovadores en enfermedad de Alzheimer y demencia frontotemporal (DFT): preventivos y personalizados

Evaluación de biomarcadores en la enfermedad de Alzheimer y la demencia frontotemporal

1. Objetivos Específicos

   Para mejorar el campo del reconocimiento de biomarcadores y facilitar la medicina preventiva y personalizada, ahora planteamos la siguiente pregunta: ¿la población de pacientes israelíes presenta un perfil de proteínas plasmáticas similar al descrito anteriormente para otras poblaciones (Marksteiner et al., 2011)?

   Los estudios se realizarán mediante cuantificación de transcritos de ARN, reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (células sanguíneas y LCR) y detección inmunoquímica a nivel de proteínas (LCR y suero).

2. Métodos:

Linfocitos:

Se aíslan linfocitos humanos a partir de 10 ml de sangre venosa utilizando el método de Ficoll Paque (de Rock y Taylor 1977; McCauley y Hartmann, 1982), para la extracción y determinación de ARN seguiremos los métodos descritos en nuestros manuscritos (Dresner et al. , 2011).

El plasma sanguíneo y el suero se prepararán como se describe en www.peoimmune.com. La cuantificación de proteínas se llevará a cabo utilizando el reactivo Tri (Sigma) que permite la preparación simultánea de ARN, ADN y kits de inmunodepleción y depleción de albúmina de plasma y proteínas de Sigma.

Cuantificación de proteínas: se realizará sobre proteínas celulares y también sobre proteínas plasmáticas mediante electroforesis en gel SDS-poliacrilamida, seguida de análisis western.

Las muestras de LCR se recolectarán a través de una aguja espinal insertada en el espacio vertebral L4-L5 o L3-L4 con el sujeto en decúbito lateral. Un ml de LCR derivado de cada paciente se sumergirá inmediatamente en hielo, con mantenimiento posterior a -70 grados C (o en hielo seco durante el envío) hasta el momento del ensayo. Medio ml de cada muestra de LCR se concentrará mediante liofilización en un Speed-Vac (Holten, Gydevang, Dinamarca) hasta aproximadamente 0,1 ml. La inmunotransferencia de proteínas del LCR se realizará usando una metodología similar a la descrita anteriormente [y ver también (Kozlovsky et al., 2004)]. La expresión de proteínas se analizará mediante transferencias de Western (Shiryaev et al., 2010).

Número de pacientes:

Estimamos que se incluirán unos 30 pacientes con enfermedad de Alzheimer, 20 pacientes con demencia frontotemporal y 20 controles.

El profesor Aharon-Peretz evaluará a los pacientes con sospecha de enfermedad de Alzheimer y demencia frontotemporal e incluirá pacientes en varios estadios de la enfermedad de forma estratificada (leve, moderada y grave). Todos los pacientes habrán firmado un formulario de consentimiento informado, según las directrices de Helsinki. La evaluación clínica incluirá: evaluación física y neurológica. A todos los pacientes se les pedirá que donen 50 ml de sangre y los pacientes seleccionados se someterán a una punción lumbar. La punción lumbar se realizará con el trabajo neurológico en marcha. El profesor Gozes coordinará el aspecto científico del estudio.

Coordinadores de estudio:

Científica: Profesora Illana Gozes, PhD, Cátedra Lily y Avraham Gildor para la Investigación de Factores de Crecimiento; Director, The Adams Super Center for Brain Studies, Universidad de Tel Aviv: igozes@post.tau.ac.il Material clínico: Profesora Judith Aharon-Peretz, MD, Jefa de la "Unidad de Neurología Cognitiva" Rambam Rambam-Health Care Campus, Haifa, Israel