Biomarcadores Inovadores na Doença de Alzheimer e Demência Frontotemporal (FTD): Preventivos e Personalizados

Avaliação de biomarcadores na doença de Alzheimer e na demência frontotemporal

1. Objetivos Específicos

   Para aumentar o campo de reconhecimento de biomarcadores e facilitar a medicina preventiva e personalizada, agora estamos colocando a seguinte questão: a população de pacientes israelenses apresenta perfil de proteína plasmática semelhante ao descrito anteriormente para outras populações (Marksteiner et al., 2011).

   Os estudos serão realizados por quantificação do transcrito de RNA, reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (hemácias e líquor) e detecção imunoquímica a nível proteico (líquor e soro).

2. Métodos:

Linfócitos:

Linfócitos humanos são isolados de 10 ml de sangue venoso usando o método Ficoll Paque (de Rock e Taylor 1977; McCauley e Hartmann, 1982), para extração de RNA e determinações seguiremos os métodos descritos em nossos manuscritos (Dresner et al. , 2011).

O plasma sanguíneo e o soro serão preparados conforme descrito em www.peoimmune.com. A quantificação de proteínas será realizada utilizando o reagente Tri (Sigma) que permite a preparação simultânea de RNA, DNA e kits de imunodepleção de proteína e plasma e depleção de albumina da Sigma.

Quantificação de proteínas: será realizada em proteínas celulares e também em proteínas plasmáticas por eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida, seguida de análise western.

Amostras de LCR serão coletadas por meio de uma agulha espinhal inserida no espaço vertebral L4-L5 ou L3-L4 com o sujeito em decúbito lateral. Um ml de LCR derivado de cada paciente será imediatamente imerso em gelo, com posterior manutenção a -70 graus C (ou em gelo seco durante o transporte) até o momento do ensaio. Meio ml de cada amostra de LCR será concentrado por liofilização em um Speed-Vac (Holten, Gydevang, Dinamarca) para cerca de 0,1ml. A imunotransferência da proteína CSF será realizada usando uma metodologia semelhante à descrita acima [e ver também (Kozlovsky et al., 2004)]. A expressão da proteína será analisada por western blots (Shiryaev et al., 2010).

Número de pacientes:

Estimamos que cerca de 30 pacientes com doença de Alzheimer, 20 pacientes com demência frontotemporal e 20 controles serão incluídos.

O professor Aharon-Peretz avaliará pacientes com suspeita de doença de Alzheimer e demência frontotemporal e incluirá pacientes em vários estágios da doença de maneira estratificada (leve, moderada e grave). Todos os pacientes terão assinado um formulário de consentimento informado, de acordo com as diretrizes de Helsinki. A avaliação clínica incluirá: avaliação física e neurológica. Todos os pacientes serão solicitados a doar 50 ml de sangue e os pacientes selecionados serão submetidos a punção lombar. A punção da madeira será realizada com o trabalho neurológico feito. O professor Gozes coordenará a parte científica do estudo.

Coordenadores de estudo:

Científica: Professora Illana Gozes, PhD, The Lily and Avraham Gildor Chair for the Investigation of Growth Factors; Diretor, The Adams Super Center for Brain Studies, Tel Aviv University: igozes@post.tau.ac.il Material clínico: Professora Judith Aharon-Peretz, MD, chefe da "Unidade de Neurologia Cognitiva" Rambam Rambam-Health Care Campus, Haifa, Israel