Innovatív biomarkerek Alzheimer-kórban és frontotemporális demenciában (FTD): Megelőző és személyre szabott

Biomarkerek felmérése Alzheimer-kórban és frontotemporális demenciában

1. Konkrét célok

   A biomarkerek felismerésének fokozása, valamint a megelőző és személyre szabott orvoslás elősegítése érdekében most feltesszük a következő kérdést, hogy az izraeli betegpopuláció hasonló plazmafehérje-profilt mutat-e, mint korábban más populációk esetében (Marksteiner et al., 2011).

   A vizsgálatokat RNS-transzkriptum mennyiségi meghatározásával, kvantitatív valós idejű polimeráz láncreakcióval (vérsejtek és CSF) és immunkémiai kimutatással fehérjeszinten (CSF és szérum) végzik.

2. Mód:

Limfociták:

A humán limfocitákat 10 ml vénás vérből Ficoll Paque módszerrel izoláljuk (de Rock és Taylor 1977; McCauley és Hartmann, 1982), az RNS extrakcióhoz és meghatározásához a kéziratainkban leírt módszereket követjük (Dresner et al. , 2011).

A vérplazmát és a szérumot a www.peoimmune.com oldalon leírtak szerint készítik el. A fehérje mennyiségi meghatározása a Tri reagens (Sigma) segítségével történik, amely lehetővé teszi az RNS, a DNS és a fehérje, valamint a plazma immundepléciós és albumin kimerítő készleteinek egyidejű előállítását a Sigmától.

Fehérje mennyiségi meghatározása: ezt sejtfehérjéken és plazmafehérjéken is elvégezzük SDS-poliakrilamid gélelektroforézissel, majd Western-analízissel.

A CSF-mintákat az L4-L5 vagy L3-L4 csigolyatérbe szúrt gerinctűn keresztül veszik, miközben az alany oldalsó decubitus helyzetben van. Minden pácienstől 1 ml CSF-et azonnal jégbe merítünk, majd -70 °C-on (vagy szállítás közben szárazjégben) tartjuk a vizsgálat idejéig. Minden egyes CSF-minta fél ml-ét Speed-Vac készülékben (Holten, Gydevang, Dánia) liofilizálással körülbelül 0,1 ml-re koncentráljuk. A CSF fehérje immunoblot-vizsgálatát a fent leírthoz hasonló módszerrel végezzük [és lásd még (Kozlovsky et al., 2004)]. A fehérjeexpressziót Western blot segítségével elemezzük (Shiryaev et al., 2010).

Betegek száma:

Becsléseink szerint körülbelül 30 Alzheimer-kóros, 20 frontotemporális demenciában szenvedő beteg és 20 kontrollcsoport vesz majd részt.

Aharon-Peretz professzor értékelni fogja a feltételezett Alzheimer-kórban és frontotemporális demenciában szenvedő betegeket, és rétegzett módon bevonja a betegség különböző stádiumaiban lévő betegeket (enyhe, közepes és súlyos). Minden betegnek alá kell írnia egy tájékozott beleegyező nyilatkozatot a helsinki irányelveknek megfelelően. A klinikai értékelés a következőket tartalmazza: fizikai és neurológiai értékelés. Minden beteget felkérnek, hogy adjon 50 ml vért, és a kiválasztott betegeken átszúrják. A faszúrást a neurológiai munkával végezzük. Gozes professzor koordinálja a tanulmány tudományos aspektusát.

Tanulmányi koordinátorok:

Tudományos: Illana Gozes professzor, PhD, The Lily and Avraham Gildor Tanszék a növekedési faktorok vizsgálatáért; Igazgató, The Adams Super Center for Brain Studies, Tel Aviv University: igozes@post.tau.ac.il Klinikai anyag: Judith Aharon-Peretz professzor, MD, a „Kognitív Neurológiai Egység” vezetője Rambam Rambam-Health Care Campus, Haifa, Izrael