Инновационные биомаркеры при болезни Альцгеймера и лобно-височной деменции (ЛВД): профилактические и персонализированные

Оценка биомаркеров при болезни Альцгеймера и лобно-височной деменции

1. Конкретные цели

   Чтобы расширить область распознавания биомаркеров и облегчить профилактическую и персонализированную медицину, мы сейчас задаем следующий вопрос: имеет ли израильская популяция пациентов профиль белков плазмы, аналогичный описанному ранее для других популяций (Marksteiner et al., 2011).

   Исследования будут проводиться путем количественного определения транскриптов РНК, количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (клетки крови и ЦСЖ) и иммунохимического обнаружения на уровне белков (СМЖ и сыворотка).

2. Методы:

Лимфоциты:

Лимфоциты человека выделяют из 10 мл венозной крови с использованием метода Ficoll Paque (de Rock and Taylor 1977; McCauley and Hartmann, 1982), для выделения и определения РНК мы будем использовать методы, описанные в наших рукописях (Dresner et al. , 2011).

Плазма крови и сыворотка будут приготовлены, как описано на сайте www.peoimmune.com. Количественное определение белка будет проводиться с использованием реагента Tri (Sigma), который позволяет одновременно готовить наборы для иммунодеплеции РНК, ДНК и белков и плазмы и истощения альбумина от Sigma.

Количественное определение белка: это будет проводиться на клеточных белках, а также на белках плазмы с помощью электрофореза в SDS-полиакриламидном геле с последующим вестерн-анализом.

Образцы спинномозговой жидкости будут собираться через спинномозговую иглу, вставленную в позвоночное пространство L4-L5 или L3-L4, когда субъект находится в положении лежа на боку. Один мл спинномозговой жидкости, полученной от каждого пациента, будет немедленно погружен в лед с последующим выдерживанием при температуре -70°C (или в сухом льду во время транспортировки) до момента проведения анализа. Половину мл каждого образца спинномозговой жидкости концентрируют путем лиофилизации в Speed-Vac (Holten, Gydevang, Дания) примерно до 0,1 мл. Иммуноблоттинг белка спинномозговой жидкости будет проводиться с использованием методики, аналогичной описанной выше [см. также (Kozlovsky et al., 2004)]. Экспрессию белка будут анализировать с помощью вестерн-блоттинга (Ширяев и др., 2010).

Количество пациентов:

По нашим оценкам, будет включено около 30 пациентов с болезнью Альцгеймера, 20 пациентов с лобно-височной деменцией и 20 человек из контрольной группы.

Профессор Аарон-Перец будет оценивать пациентов с подозрением на болезнь Альцгеймера и лобно-височную деменцию и включать пациентов на различных стадиях заболевания в стратифицированном порядке (легкая, средняя и тяжелая). Все пациенты подпишут форму информированного согласия в соответствии с Хельсинкскими рекомендациями. Клиническая оценка будет включать: физическую и неврологическую оценку. Всем пациентам будет предложено сдать 50 мл крови, а некоторым пациентам будет сделана пункция пина. Пункция пина будет выполняться с неврологическим исследованием. Профессор Гозес будет координировать научный аспект исследования.

Координаторы исследования:

Научные: профессор Иллана Гозес, доктор философии, кафедра Лили и Авраама Гилдоров по исследованию факторов роста; Директор Суперцентра Адамса по изучению мозга Тель-Авивского университета: igozes@post.tau.ac.il Клинический материал: профессор Джудит Аарон-Перец, доктор медицинских наук, заведующая отделением когнитивной неврологии Rambam Rambam-Health Care Campus, Хайфа, Израиль