Innovative Biomarker bei Alzheimer und frontotemporaler Demenz (FTD): Präventiv und personalisiert

Bewertung von Biomarkern bei Alzheimer und frontotemporaler Demenz

1. Spezifische Ziele

   Um den Bereich der Biomarker-Erkennung zu verbessern und präventive und personalisierte Medizin zu erleichtern, stellen wir nun die folgende Frage: Weist die israelische Patientenpopulation ein ähnliches Plasmaproteinprofil auf wie zuvor für andere Populationen beschrieben (Marksteiner et al., 2011)?

   Die Studien werden mittels RNA-Transkriptquantifizierung, quantitativer Echtzeit-Polymerasekettenreaktion (Blutzellen und Liquor) und immunchemischem Nachweis auf Proteinebene (Liquor und Serum) durchgeführt.

2. Methoden:

Lymphozyten:

Menschliche Lymphozyten werden aus 10 ml venösem Blut mit der Ficoll-Paque-Methode (de Rock und Taylor 1977; McCauley und Hartmann, 1982) isoliert. Für die RNA-Extraktion und -Bestimmungen werden wir die in unseren Manuskripten beschriebenen Methoden anwenden (Dresner et al. , 2011).

Blutplasma und Serum werden wie unter www.peoimmune.com beschrieben zubereitet. Die Proteinquantifizierung wird mit dem Tri-Reagenz (Sigma) durchgeführt, das die gleichzeitige Herstellung von RNA-, DNA- und Protein- sowie Plasma-Immunodepletions- und Albumindepletions-Kits von Sigma ermöglicht.

Proteinquantifizierung: Diese wird an zellulären Proteinen und auch an Plasmaproteinen mittels SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese und anschließender Western-Analyse durchgeführt.

CSF-Proben werden durch eine Spinalnadel entnommen, die in den Wirbelraum L4-L5 oder L3-L4 eingeführt wird, wobei sich das Subjekt in der seitlichen Dekubitusposition befindet. Ein ml Liquor jedes Patienten wird sofort in Eis getaucht und anschließend bis zum Zeitpunkt des Tests bei -70 °C (oder während des Transports in Trockeneis) aufbewahrt. Ein halber ml jeder CSF-Probe wird durch Lyophilisierung in einem Speed-Vac (Holten, Gydevang, Dänemark) auf etwa 0,1 ml konzentriert. Das CSF-Protein-Immunblotting wird mit einer ähnlichen Methodik wie oben beschrieben durchgeführt [und siehe auch (Kozlovsky et al., 2004)]. Die Proteinexpression wird durch Western Blots analysiert (Shiryaev et al., 2010).

Anzahl Patienten:

Wir schätzen, dass etwa 30 Patienten mit Alzheimer-Krankheit, 20 Patienten mit frontotemporaler Demenz und 20 Kontrollpersonen eingeschlossen werden.

Professor Aharon-Peretz wird Patienten mit Verdacht auf Alzheimer-Krankheit und frontotemporale Demenz untersuchen und Patienten in verschiedenen Krankheitsstadien stratifiziert (leicht, mittelschwer und schwer) einbeziehen. Alle Patienten haben eine Einverständniserklärung gemäß den Helsinki-Richtlinien unterzeichnet. Die klinische Bewertung umfasst: körperliche und neurologische Bewertung. Alle Patienten werden gebeten, 50 ml Blut zu spenden, und ausgewählte Patienten werden einer Lumbalpunktion unterzogen. Die Lendenwirbelsäulenpunktion wird zusammen mit der neurologischen Untersuchung durchgeführt. Professor Gozes wird den wissenschaftlichen Aspekt der Studie koordinieren.

Studienkoordinatoren:

Wissenschaftlich: Professorin Illana Gozes, PhD, The Lily und Avraham Gildor Lehrstuhl für die Untersuchung von Wachstumsfaktoren; Direktor, The Adams Super Center for Brain Studies, Universität Tel Aviv: igozes@post.tau.ac.il Klinisches Material: Professorin Judith Aharon-Peretz, MD, Leiterin der „Cognitive Neurology Unit“ Rambam Rambam-Health Care Campus, Haifa, Israel