Biomarqueurs innovants dans la maladie d'Alzheimer et la démence frontotemporale (FTD) : préventifs et personnalisés

Évaluation des biomarqueurs dans la maladie d'Alzheimer et la démence frontotemporale

1. Objectifs spécifiques

   Pour améliorer le domaine de la reconnaissance des biomarqueurs et faciliter la médecine préventive et personnalisée, nous posons maintenant la question suivante : la population de patients israéliens présente-t-elle un profil de protéines plasmatiques similaire à celui décrit précédemment pour d'autres populations (Marksteiner et al., 2011).

   Des études seront réalisées par quantification des transcrits d'ARN, amplification en chaîne par polymérase quantitative en temps réel (cellules sanguines et LCR) et détection immunochimique au niveau des protéines (LCR et sérum).

2. Méthodes :

Lymphocytes :

Les lymphocytes humains sont isolés à partir de 10 ml de sang veineux en utilisant la méthode Ficoll Paque (de Rock et Taylor 1977; McCauley et Hartmann, 1982), pour l'extraction et les déterminations de l'ARN, nous suivrons les méthodes décrites dans nos manuscrits (Dresner et al. , 2011).

Le plasma sanguin et le sérum seront préparés comme indiqué sur www.peoimmune.com. La quantification des protéines sera effectuée à l'aide du réactif Tri (Sigma) qui permet la préparation simultanée d'ARN, d'ADN et de protéines et de kits d'immunodéplétion plasmatique et de déplétion d'albumine de Sigma.

Quantification des protéines : elle sera réalisée sur des protéines cellulaires et également sur des protéines plasmatiques par électrophorèse sur gel de SDS-polyacrylamide, suivie d'une analyse western.

Les échantillons de LCR seront prélevés à l'aide d'une aiguille rachidienne insérée dans l'espace vertébral L4-L5 ou L3-L4 avec le sujet en décubitus latéral. Un ml de LCR dérivé de chaque patient sera immédiatement immergé dans de la glace, avec un maintien ultérieur à -70 °C (ou dans de la neige carbonique pendant l'expédition) jusqu'au moment du dosage. Un demi-ml de chaque échantillon de LCR sera concentré par lyophilisation dans un Speed-Vac (Holten, Gydevang, Danemark) à environ 0,1 ml. L'immunotransfert des protéines du LCR sera effectué en utilisant une méthodologie similaire à celle décrite ci-dessus [et voir également (Kozlovsky et al., 2004)]. L'expression des protéines sera analysée par western blots (Shiryaev et al., 2010).

Nombre de malades :

Nous estimons qu'environ 30 patients atteints de la maladie d'Alzheimer, 20 patients atteints de démence frontotemporale et 20 témoins seront inclus.

Le professeur Aharon-Peretz évaluera les patients suspects de maladie d'Alzheimer et de démence frontotemporale et inclura des patients à différents stades de la maladie de manière stratifiée (légère, modérée et sévère). Tous les patients auront signé un formulaire de consentement éclairé, conformément aux directives d'Helsinki. L'évaluation clinique comprendra : une évaluation physique et neurologique. Tous les patients seront invités à donner 50 ml de sang et les patients sélectionnés subiront une ponction lombaire. La ponction lombaire sera effectuée avec le bilan neurologique. Le professeur Gozes coordonnera l'aspect scientifique de l'étude.

Coordinateurs d'études :

Scientifique : Professeur Illana Gozes, PhD, Chaire Lily et Avraham Gildor pour l'étude des facteurs de croissance ; Directeur, The Adams Super Center for Brain Studies, Université de Tel Aviv : igozes@post.tau.ac.il Matériel clinique : Professeur Judith Aharon-Peretz, MD, Chef de « Cognitive Neurology Unit » Rambam Rambam-Health Care Campus, Haïfa, Israël