Innovatiiviset biomarkkerit Alzheimerin taudissa ja frontotemporaalisessa dementiassa (FTD): ennaltaehkäisevä ja yksilöllinen

Alzheimerin taudin ja frontotemporaalisen dementian biomarkkereiden arviointi

1. Erityiset tavoitteet

   Biomarkkerien tunnistamisen tehostamiseksi ja ennaltaehkäisevän ja personoidun lääketieteen helpottamiseksi esitämme nyt seuraavan kysymyksen, onko Israelin potilaspopulaatiolla samanlainen plasmaproteiiniprofiili kuin aiemmin on kuvattu muille populaatioille (Marksteiner et al., 2011).

   Tutkimukset suoritetaan RNA-transkriptin kvantifioinnilla, kvantitatiivisella reaaliaikaisella polymeraasiketjureaktiolla (verisolut ja CSF) ja immunokemiallisella detektiolla proteiinitasolla (CSF ja seerumi).

2. Menetelmät:

Lymfosyytit:

Ihmisen lymfosyytit eristetään 10 ml:sta laskimoverta Ficoll Paque -menetelmällä (de Rock ja Taylor 1977; McCauley ja Hartmann, 1982), RNA:n uuttamista ja määrityksiä varten seuraamme käsikirjoituksissamme kuvattuja menetelmiä (Dresner et al. , 2011).

Veriplasma ja seerumi valmistetaan osoitteessa www.peoimmune.com kuvatulla tavalla. Proteiinin kvantitointi suoritetaan käyttämällä Tri-reagenssia (Sigma), joka mahdollistaa RNA:n, DNA:n ja proteiinien sekä plasman immunodepletio- ja albumiinin poistopakkausten samanaikaisen valmistamisen Sigmasta.

Proteiinin kvantifiointi: tämä suoritetaan solun proteiineille ja myös plasmaproteiineille SDS-polyakryyliamidigeelielektroforeesilla, jota seuraa Western-analyysi.

CSF-näytteet kerätään selkärangan neulan kautta, joka työnnetään L4-L5- tai L3-L4-nikamatilaan potilaan ollessa lateraalisessa makuuasennossa. Yksi millilitra kustakin potilaasta peräisin olevaa aivo-selkäydinnestettä upotetaan välittömästi jäihin, minkä jälkeen se pidetään -70 asteessa (tai kuivajäässä kuljetuksen aikana) analyysiin asti. Puolet ml jokaisesta CSF-näytteestä konsentroidaan lyofilisoimalla Speed-Vac-laitteessa (Holten, Gydevang, Tanska) noin 0,1 ml:ksi. CSF-proteiinin immunoblottaus suoritetaan käyttämällä samanlaista menetelmää kuin edellä on kuvattu [ja katso myös (Kozlovsky et ai., 2004)]. Proteiinin ilmentyminen analysoidaan Western blotilla (Shiryaev et ai., 2010).

Potilaiden määrä:

Arvioimme mukaan noin 30 Alzheimerin tautia sairastavaa potilasta, 20 frontotemporaalista dementiapotilasta ja 20 kontrollipotilasta.

Professori Aharon-Peretz arvioi potilaita, joilla epäillään Alzheimerin tautia ja frontotemporaalista dementiaa ja ottaa mukaan potilaat eri taudin vaiheissa kerrostettuna (lievä, kohtalainen ja vaikea). Kaikki potilaat ovat allekirjoittaneet tietoisen suostumuslomakkeen Helsingin ohjeiden mukaisesti. Kliininen arviointi sisältää: fyysisen ja neurologisen arvioinnin. Kaikkia potilaita pyydetään luovuttamaan 50 ml verta ja valituille potilaille tehdään puupunktio. Puunpunktio tehdään neurologisen työn ollessa käynnissä. Professori Gozes koordinoi tutkimuksen tieteellistä puolta.

Opintokoordinaattorit:

Tieteellinen: Professori Illana Gozes, PhD, Lily ja Avraham Gildor Kasvutekijöiden tutkimuksen katedraali; Johtaja, Adams Super Center for Brain Studies, Tel Avivin yliopisto: igozes@post.tau.ac.il Kliininen materiaali: Professori Judith Aharon-Peretz, MD, "Kognitiivisen neurologian yksikön" johtaja Rambam Rambam-Health Care Campus, Haifa, Israel