Biomarcatori innovativi nella malattia di Alzheimer e nella demenza frontotemporale (FTD): preventivi e personalizzati

Valutazione dei biomarcatori nella malattia di Alzheimer e nella demenza frontotemporale

1. Obiettivi specifici

   Per migliorare il campo del riconoscimento dei biomarcatori e facilitare la medicina preventiva e personalizzata, stiamo ora ponendo la seguente domanda: la popolazione di pazienti israeliani presenta un profilo proteico plasmatico simile a quello descritto in precedenza per altre popolazioni (Marksteiner et al., 2011).

   Gli studi saranno condotti mediante quantificazione del trascritto di RNA, reazione quantitativa a catena della polimerasi in tempo reale (globuli e CSF) e rilevazione immunochimica a livello proteico (CSF e siero).

2. Metodi:

Linfociti:

I linfociti umani sono isolati da 10 ml di sangue venoso utilizzando il metodo Ficoll Paque (de Rock e Taylor 1977; McCauley e Hartmann, 1982), per l'estrazione e le determinazioni dell'RNA seguiremo i metodi descritti nei nostri manoscritti (Dresner et al. , 2011).

Il plasma sanguigno e il siero saranno preparati come indicato in www.peoimmune.com. La quantificazione delle proteine ​​verrà effettuata utilizzando il reagente Tri (Sigma) che consente la preparazione simultanea di kit Sigma per l'immunodeplezione di RNA, DNA e proteine ​​e plasma e per la deplezione dell'albumina.

Quantificazione proteica: questa sarà effettuata su proteine ​​cellulari ed anche su proteine ​​plasmatiche mediante elettroforesi su gel di SDS-poliacrilammide, seguita da analisi western.

I campioni di CSF saranno raccolti attraverso un ago spinale inserito nello spazio vertebrale L4-L5 o L3-L4 con il soggetto in decubito laterale. Un ml di CSF prelevato da ciascun paziente verrà immediatamente immerso in ghiaccio, con successivo mantenimento a -70°C (o in ghiaccio secco durante la spedizione) fino al momento del dosaggio. Mezzo ml di ciascun campione di CSF sarà concentrato mediante liofilizzazione in uno Speed-Vac (Holten, Gydevang, Danimarca) a circa 0,1 ml. L'immunoblotting delle proteine ​​del CSF sarà eseguito utilizzando una metodologia simile a quella descritta sopra [e vedi anche (Kozlovsky et al., 2004)]. L'espressione proteica sarà analizzata mediante western blot (Shiryaev et al., 2010).

Numero di pazienti:

Stimiamo che saranno inclusi circa 30 pazienti con malattia di Alzheimer, 20 pazienti con demenza frontotemporale e 20 controlli.

Il professor Aharon-Peretz valuterà i pazienti con sospetta malattia di Alzheimer e demenza frontotemporale e includerà pazienti a vari stadi della malattia in modo stratificato (lieve, moderato e grave). Tutti i pazienti avranno firmato un modulo di consenso informato, come da linee guida di Helsinki. La valutazione clinica includerà: valutazione fisica e neurologica. A tutti i pazienti verrà chiesto di donare 50 ml di sangue e i pazienti selezionati verranno sottoposti a puntura lombare. La puntura del legname verrà eseguita con il lavoro neurologico. Il professor Gozes coordinerà l'aspetto scientifico dello studio.

Coordinatori dello studio:

Scientifico: Professoressa Illana Gozes, PhD, The Lily e Avraham Gildor Chair for the Investigation of Growth Factors; Direttore, The Adams Super Center for Brain Studies, Università di Tel Aviv: igozes@post.tau.ac.il Materiale clinico: Professoressa Judith Aharon-Peretz, MD, Responsabile "Unità di neurologia cognitiva" Rambam Rambam-Health Care Campus, Haifa, Israele