Innowacyjne biomarkery w chorobie Alzheimera i otępieniu czołowo-skroniowym (FTD): zapobiegawcze i spersonalizowane

Ocena biomarkerów w chorobie Alzheimera i otępieniu czołowo-skroniowym

1. Konkretne cele

   Aby rozszerzyć zakres rozpoznawania biomarkerów i ułatwić medycynę prewencyjną i spersonalizowaną, stawiamy teraz następujące pytanie: czy populacja izraelskich pacjentów ma podobny profil białek osocza, jak opisano wcześniej dla innych populacji (Marksteiner i in., 2011).

   Badania będą prowadzone poprzez oznaczenie ilościowe transkryptu RNA, ilościową reakcję łańcuchową polimerazy w czasie rzeczywistym (krwinki i płyn mózgowo-rdzeniowy) oraz detekcję immunochemiczną na poziomie białka (płyn mózgowo-rdzeniowy i surowica).

2. Metody:

Limfocyty:

Ludzkie limfocyty są izolowane z 10 ml krwi żylnej przy użyciu metody Ficoll Paque (de Rock i Taylor 1977; McCauley i Hartmann, 1982). , 2011).

Osocze krwi i surowica zostaną przygotowane zgodnie z opisem na stronie www.peoimmune.com. Oznaczenie ilościowe białek zostanie przeprowadzone przy użyciu odczynnika Tri (Sigma), który pozwala na jednoczesne przygotowanie zestawów do immunodeplecji i albumin do deplecji RNA, DNA i białek oraz osocza firmy Sigma.

Kwantyfikacja białka: zostanie przeprowadzona na białkach komórkowych, a także na białkach osocza za pomocą elektroforezy w żelu SDS-poliakryloamidowym, po której nastąpi analiza typu western.

Próbki płynu mózgowo-rdzeniowego będą pobierane przez igłę rdzeniową wkłutą w przestrzeń międzykręgową L4-L5 lub L3-L4 z pacjentem w pozycji bocznej. Jeden ml płynu mózgowo-rdzeniowego pochodzącego od każdego pacjenta zostanie natychmiast zanurzony w lodzie, a następnie utrzymywany w temperaturze -70 stopni C (lub w suchym lodzie podczas transportu) do czasu wykonania testu. Połowa ml każdej próbki płynu mózgowo-rdzeniowego zostanie zatężona przez liofilizację w Speed-Vac (Holten, Gydevang, Dania) do około 0,1 ml. Immunoblotting białek płynu mózgowo-rdzeniowego zostanie przeprowadzony przy użyciu podobnej metodologii, jak opisana powyżej [i patrz także (Kozlovsky i in., 2004)]. Ekspresja białek będzie analizowana metodą Western blot (Shiryaev i in., 2010).

Liczba pacjentów:

Szacujemy, że zostanie włączonych około 30 pacjentów z chorobą Alzheimera, 20 pacjentów z otępieniem czołowo-skroniowym i 20 osób z grupy kontrolnej.

Profesor Aharon-Peretz oceni pacjentów z podejrzeniem choroby Alzheimera i otępienia czołowo-skroniowego i włączy pacjentów w różnych stadiach choroby w sposób warstwowy (łagodny, umiarkowany i ciężki). Wszyscy pacjenci będą mieli podpisany formularz świadomej zgody, zgodnie z wytycznymi helsińskimi. Ocena kliniczna będzie obejmować: ocenę fizyczną i neurologiczną. Wszyscy pacjenci zostaną poproszeni o oddanie 50 ml krwi, a wybrani pacjenci zostaną poddani nakłuciu drewna. Nakłucie tarcicy zostanie wykonane wraz z opracowaniem neurologicznym. Profesor Gozes będzie koordynował naukowy aspekt badań.

Koordynatorzy badań:

Naukowe: profesor Illana Gozes, PhD, The Lily and Avraham Gildor Chair for the Investigation of Growth Factors; Dyrektor, The Adams Super Centre for Brain Studies, Uniwersytet w Tel Awiwie: igozes@post.tau.ac.il Materiał kliniczny: Profesor Judith Aharon-Peretz, MD, Kierownik „Jednostki Neurologii Poznawczej” Rambam Rambam-Health Care Campus, Hajfa, Izrael