Postmenopauzální kůže obličeje po lokální léčbě estradiolem a genisteinem

Postmenopauzální dobrovolníci byli rekrutováni v Brazílii z Endokrinologické gynekologické divize Gynekologického oddělení Federální univerzity v São Paulu (UNIFESP). Všechny ženy se zúčastnily této prospektivní, randomizované, dvojitě zaslepené a estrogenem kontrolované studie a schválené místním Etickým a výzkumným výborem (Zpráva č. 386/2004). Hodnocení všech předmětů sestávalo z podrobné anamnézy, fyzikální zkoušky a laboratorního zpracování. Protokol studie byl schválen komisí pro vyšetřování člověka UNIFESP School of Medicine a každý účastník musel před zařazením poskytnout písemný informovaný souhlas.

Intervence Nezávislí lékárníci vydávali buď nádobky s isoflavonem nebo estrogenem podle počítačem generovaného randomizačního seznamu. Nádoby, stejně jako sklenice na ošetření, měly stejný vzhled a barvu. Výzkumníci byli zodpovědní za to, že ženy při vstupu do studie přidělily další dostupné číslo a každá žena si vyzvedla své nádoby přímo z oddělení lékárny. Kód byl výzkumníkům odhalen, jakmile byly dokončeny nábory, sběr dat a histologické analýzy. Pokud se vyskytl zdravotní problém, vyšetřoval ji nezávislý lékař, který nebyl vůči léčebné skupině pacientky zaslepen. V případě potřeby tento lékař předepsal laboratorní vyšetření k vyloučení jakýchkoli závažných systémových vedlejších účinků. Před a po 24týdenní léčbě gelem byla provedena biopsie kůže obličeje z preaurikulární oblasti číslo dvě. Ženy si gel nanášely na pokožku obličeje denně v noci a ráno pouze gelovým opalovacím krémem. Bylo jim doporučeno nepoužívat žádný jiný krém. Pro posouzení možných systémových hormonálních účinků byly při všech návštěvách (výchozí stav a po 6, 12, 18 a 24 týdnech léčby) odebrány vzorky hormonální vaginální cytologie a vzorky krve estradiolu před a po léčbě.

Skupiny Účastníci prošli každou fází studie. Po ukončení studie se štítek otevřel a léčebné skupiny se stejným počtem byly klasifikovány. Pro každou studijní skupinu bylo požadováno 15 pacientek: skupina E léčená gelem s 0,01 % 17-β estradiolu (n = 15) a skupina G léčená gelem s isoflavony (genistein 4 %) (n = 15).

Zpracování materiálu Po odběru byly biopsie ihned fixovány na 24 hodin v 10% roztoku formaldehydu a následně zpracovány na parafín dehydratací v ethanolu ve zvyšujících se koncentracích, diafanizací v xylolu a impregnací tekutým parafínem v sušicí peci nastavené na teplotu 60 °C (metodika doporučuje Michalany, 1998). Parafínové bloky byly podrobeny řezům 3 μm pomocí mikrotomu Minot. Řezy pro imunohistochemii byly umístěny na sklíčka předem ošetřená silanem na 5 % a přenesena do sušárny při 37 °C po dobu 24 hodin k sušení. Dále byly vyrobeny řezy 20 μm a umístěny do zkumavek o objemu 2 ml pro biochemické zpracování.