Skóra twarzy po menopauzie po miejscowym leczeniu estradiolem i genisteiną

Ochotniczki po menopauzie rekrutowano w Brazylii z Oddziału Ginekologii Endokrynologicznej Wydziału Ginekologii Uniwersytetu Federalnego w São Paulo (UNIFESP). Wszystkie kobiety wzięły udział w tym prospektywnym, randomizowanym badaniu z podwójnie ślepą próbą i kontrolą estrogenu, zatwierdzonym przez lokalną Komisję ds. Etyki i Badań Naukowych (raport nr 386/2004). Ocena wszystkich badanych składała się ze szczegółowego wywiadu, badania fizykalnego i badań laboratoryjnych. Protokół badania został zatwierdzony przez UNIFESP School of Medicine Human Investigation Committee, a każdy uczestnik musiał wyrazić pisemną świadomą zgodę przed rejestracją.

Interwencja Niezależni farmaceuci wydawali pojemniki z izoflawonami lub estrogenami zgodnie z wygenerowaną komputerowo listą randomizacyjną. Pojemniki, a także słoiczek na zabiegi miały identyczny wygląd i kolor. Badacze byli odpowiedzialni za obserwowanie, jak kobiety przydzielały następny dostępny numer po wejściu do badania, a każda kobieta odbierała swoje pojemniki bezpośrednio z działu apteki. Kod został ujawniony naukowcom po zakończeniu rekrutacji, zbierania danych i analiz histologicznych. Jeśli wystąpił problem zdrowotny, badał ją niezależny lekarz, który nie znał grupy leczenia pacjentki. W razie potrzeby lekarz ten przepisał badania laboratoryjne w celu wykluczenia poważnych ogólnoustrojowych skutków ubocznych. Przed i po 24-tygodniowym leczeniu żelem wykonano biopsję numer dwa skóry twarzy z okolic przedusznych. Kobiety nakładały żel na skórę twarzy codziennie na noc, a rano stosowały wyłącznie żelowy filtr przeciwsłoneczny. Poradzono im, aby nie używali żadnego innego kremu. Aby ocenić możliwe ogólnoustrojowe działanie hormonalne, podczas wszystkich wizyt (wyjściowo oraz po 6, 12, 18 i 24 tygodniach leczenia) pobierano próbki hormonalnej cytologii pochwy, a przed i po leczeniu pobierano próbki krwi z estradiolem.

Grupy Uczestnicy przechodzili przez każdy etap badania. Po zakończeniu badania etykietę otwierano i klasyfikowano grupy leczone o tym samym numerze. Do każdej grupy badawczej potrzebnych było piętnastu pacjentów: grupa E, leczona żelem z 17-β-estradiolem 0,01% (n = 15) oraz grupa G, leczona żelem z izoflawonami (genisteina 4%) (n = 15).

Obróbka materiału Po pobraniu biopsje były natychmiast utrwalane przez 24 godziny w 10% roztworze formaldehydu, a następnie przetwarzane na parafinę poprzez odwodnienie w etanolu w rosnących stężeniach, diafanizację w ksylolu i impregnację płynną parafiną w suszarce ustawionej na temp. 60°C (metodologia zalecana przez Michalany, 1998). Bloczki parafinowe poddano cięciom o grubości 3 μm za pomocą mikrotomu Minot. Wycinki do immunohistochemii umieszczono na szkiełkach uprzednio traktowanych silanem do 5% i umieszczono w suszarce w 37°C na 24 godziny w celu wysuszenia. Dodatkowo wykonano skrawki o grubości 20 μm i umieszczono w probówkach o pojemności 2 ml do obróbki biochemicznej.