Postmenopausal ansiktshud efter östradiol och genistein topisk behandling

Postmenopausala volontärer rekryterades i Brasilien från endokrinologisk gynekologiavdelning vid Gynecology Department vid Federal University of São Paulo (UNIFESP). Alla kvinnor deltog i denna prospektiva, randomiserade, dubbelblinda och östrogenkontrollerade studie och godkänd av den lokala etik- och forskningskommittén (Rapport nr 386/2004). Utvärderingen av alla ämnen bestod av en detaljerad historia, en fysisk undersökning och en laboratorieundersökning. Studieprotokollet godkändes av UNIFESP School of Medicine Human Investigation Committee, och varje deltagare var tvungen att ge skriftligt informerat samtycke innan registreringen.

Intervention Oberoende farmaceuter dispenserade antingen isoflavon- eller östrogenbehållare enligt en datorgenererad randomiseringslista. Behållarna, samt en burk för behandlingar, hade identiskt utseende och färg. Forskarna var ansvariga för att se kvinnorna tilldelas nästa tillgängliga nummer när de gick in i försöket, och varje kvinna hämtade sina behållare direkt från apoteksavdelningen. Koden avslöjades för forskarna när rekrytering, datainsamling och histologiska analyser var klara. Om ett hälsoproblem uppstod undersökte en oberoende läkare som var blind för patientens behandlingsgrupp henne. Vid behov ordinerade denna läkare laboratorieundersökningar för att utesluta allvarliga systemiska biverkningar. En punchbiopsi nummer två av ansiktshud från det preaurikulära området utfördes före och efter den 24 veckor långa gelbehandlingen. Kvinnorna applicerade gelen på sin ansiktshud dagligen på natten, och på morgonen använde de endast en gelsolkräm. De fick rådet att inte använda någon annan kräm. För att bedöma möjliga systemiska hormonella effekter togs hormonella vaginala cytologiprover vid alla besök (baslinje och efter 6, 12, 18 och 24 veckors behandling) och östradiolblodprover före och efter behandlingen.

Grupper Deltagarna flödade genom varje steg i studien. Efter avslutad studie öppnades etiketten och behandlingsgrupperna med samma nummer klassificerades. Femton patienter krävdes för varje studiegrupp: grupp E, behandlad med en gel med 17-β östradiol 0,01% (n = 15), och grupp G, behandlad med en gel med isoflavoner (genistein 4%) (n = 15).

Bearbetning av materialet Efter insamlingen fixerades biopsierna omedelbart under 24 timmar i 10 % formaldehydlösning och bearbetades sedan för paraffin via dehydrering i etanol i ökande koncentrationer, diafanisering i xylol och impregnering med flytande paraffin i torkugn inställd på en temperatur på ca. 60 °C (metod rekommenderad av Michalany, 1998). Paraffinblocken utsattes för snitt på 3 μm med en Minot-mikrotom. Skärningarna för immunhistokemi placerades på objektglas som tidigare behandlats med silan till 5 % och fördes in i ugnen vid 37 °C i 24 timmar för torkning. Dessutom gjordes sektioner av 20 μm och placerades i rör på 2 ml för den biokemiska bearbetningen.