Postmenopausale Gesichtshaut nach topischer Behandlung mit Estradiol und Genistein

Postmenopausale Freiwillige wurden in Brasilien aus der Abteilung für endokrinologische Gynäkologie der gynäkologischen Abteilung der Bundesuniversität von São Paulo (UNIFESP) rekrutiert. Alle Frauen nahmen an dieser prospektiven, randomisierten, doppelblinden und Östrogen-kontrollierten Studie teil und wurden von der örtlichen Ethik- und Forschungskommission genehmigt (Bericht Nr. 386/2004). Die Beurteilung aller Probanden bestand aus einer detaillierten Anamnese, einer körperlichen Untersuchung und einer Laboruntersuchung. Das Studienprotokoll wurde vom Human Investigation Committee der UNIFESP School of Medicine genehmigt und jeder Teilnehmer musste vor der Einschreibung eine schriftliche Einverständniserklärung abgeben.

Intervention: Unabhängige Apotheker verteilten entweder Isoflavon- oder Östrogenbehälter gemäß einer computergenerierten Randomisierungsliste. Die Behälter sowie ein Behandlungsgefäß hatten das gleiche Aussehen und die gleiche Farbe. Die Forscher waren dafür verantwortlich, dass den Frauen bei Eintritt in die Studie die nächste verfügbare Nummer zugewiesen wurde, und jede Frau holte ihre Behälter direkt in der Apothekenabteilung ab. Der Code wurde den Forschern bekannt gegeben, sobald die Rekrutierung, die Datenerfassung und die histologischen Analysen abgeschlossen waren. Wenn ein gesundheitliches Problem auftrat, untersuchte ein unabhängiger Arzt, der gegenüber der Behandlungsgruppe der Patientin blind war, die Patientin. Bei Bedarf verordnete dieser Arzt Laboruntersuchungen zum Ausschluss schwerwiegender systemischer Nebenwirkungen. Vor und nach der 24-wöchigen Gelbehandlung wurde eine zweite Stanzbiopsie der Gesichtshaut aus dem präaurikulären Bereich durchgeführt. Die Frauen trugen das Gel täglich abends auf ihre Gesichtshaut auf und verwendeten morgens nur einen Gel-Sonnenschutz. Es wurde ihnen geraten, keine andere Creme zu verwenden. Um mögliche systemische hormonelle Auswirkungen zu beurteilen, wurden bei allen Besuchen (zu Beginn und nach 6, 12, 18 und 24 Behandlungswochen) hormonelle vaginale Zytologieproben sowie vor und nach der Behandlung Östradiol-Blutproben entnommen.

Gruppen Die Teilnehmer durchliefen jede Phase der Studie. Nach Studienende wurde das Etikett geöffnet und die Behandlungsgruppen mit der gleichen Nummer klassifiziert. Für jede Studiengruppe waren fünfzehn Patienten erforderlich: Gruppe E, behandelt mit einem Gel mit 17-β-Östradiol 0,01 % (n = 15), und Gruppe G, behandelt mit einem Gel mit Isoflavonen (Genistein 4 %) (n = 15).

Verarbeitung des Materials Nach der Entnahme wurden die Biopsien sofort 24 Stunden lang in 10 %iger Formaldehydlösung fixiert und dann durch Dehydratisierung in Ethanol in steigenden Konzentrationen, Diaphanisierung in Xylol und Imprägnierung mit flüssigem Paraffin in einem auf eine Temperatur von 100 °C eingestellten Trockenofen auf Paraffin verarbeitet 60 °C (Methodik empfohlen von Michalany, 1998). Die Paraffinblöcke wurden mit einem Minot-Mikrotom Schnitten von 3 μm unterzogen. Die Schnitte für die Immunhistochemie wurden auf zuvor mit 5 % Silan behandelte Objektträger gelegt und zum Trocknen 24 Stunden lang bei 37 °C in den Ofen gebracht. Zusätzlich wurden Schnitte von 20 μm angefertigt und zur biochemischen Verarbeitung in Röhrchen von 2 ml gegeben.