Olej z brutnáku lékařského a echia na astma (Borage)

Abychom vyhodnotili mechanismy, kterými olej ze semen brutnáku lékařského a olej ze semen echia blokují tvorbu mediátorů u astmatu, provedli jsme návrh křížové studie, abychom snížili počet pacientů potřebných pro studii. Každé léčebné období bylo šest týdnů s šestitýdenním vymývacím obdobím. Pro jednoduchost jsou všechny výpočty výkonu prováděny za předpokladu jediného faktoru nebo predikční proměnné a jediné výsledné nebo výsledné proměnné. Zaměřili jsme se na změny v tvorbě mediátorů efektorovými buňkami. Níže uvedené výpočty naznačují, že jsme se rozhodli zachytit klinicky významné účinky potenciálně důležitých vysvětlujících proměnných s přijatelnou nebo vysokou silou.

1. Návrh studie Cílem bylo prozkoumat mechanismy, které jsou základem účinků oleje ze semen brutnáku lékařského a oleje ze semen echia na produkci prozánětlivých mediátorů efektorovými leukocyty.

V léčebné větvi subjekty konzumovaly 4,0 g/den oleje ze semen brutnáku lékařského a 7,0 g/den oleje ze semen echia (obsahující celkem ~1,6 g/den GLA a ~0,9 g/den SDA). Oleje byly baleny v kapslích, z nichž každá obsahovala 1 gram oleje. Proto subjekty požijí 10 tobolek denně (3 ráno, 3 odpoledne a 4 večer) s jídlem. V rameni s placebem subjekty užívaly odpovídající kapsle obsahující kukuřičný olej; tři 1 gramové tobolky ráno a odpoledne a čtyři večer s jídlem.

Studie začala screeningovou návštěvou. Všichni jedinci měli lékařem diagnostikované astma. Všichni provedli základní sadu měření plicních funkcí. Vstoupili do 2týdenního zaváděcího období, během kterého si vedli deník maximálních průtoků, příznaků astmatu a užívání beta-agonistů. Subjekty byly poučeny o technice špičkového průtoku a byly požádány, aby pokaždé provedly tři manévry. Manévr byl považován za technicky dostačující, pokud odchylky v hodnotách získaných ze tří pokusů byly 10% navzájem a nejvyšší hodnota byla zaznamenána v deníku. Subjekty, jejichž deníky byly > 80 % kompletní, vstoupily do studie a byly náhodně přiřazeny k aktivní léčbě nebo placebu. Spirometrie byla opakována. Byla odebrána krev pro složení mastných kyselin plazmy a leukocytů, generaci LT a DNA pro genotypizaci v lokusu LTC4S. Subjektům byly poskytnuty deníky špičkového průtoku, byly instruovány o vhodném výkonu nebo manévrech špičkového průtoku a byly požádány, aby zaznamenávaly ranní a večerní špičkový průtok každý den (pokaždé odrážející nejlepší ze tří pokusů). Po třech týdnech léčby se odeberou deníkové karty a zopakuje se spirometrie. Po šesti týdnech léčby byla odebrána krev pro monitorování bezpečnosti, pro měření mastných kyselin v plazmě a leukocytech a pro funkční analýzy. Spirometrie byla opakována. Subjekty poté vstoupily do šestitýdenního vymývacího období. Dva týdny před koncem tohoto období si opět začali vést deníkové karty. Na konci 6týdenního vymývacího období vstoupili do zkřížené léčebné fáze (šest týdnů), která se řídila stejným protokolem jako první léčebné období s hodnocením analýz mastných kyselin, studií buněčné funkce, monitorováním bezpečnosti a spirometrií. Před a po každém léčebném období bylo provedeno těhotenské testování. Při každé návštěvě (3týdenní intervaly během ramene studie s placebem a aktivní léčbou) budou odebrány mléčné karty (s výsledky monitorování maximálního průtoku).

3. Statistické analýzy

A. Výpočty výkonu - Pro jednoduchost se všechny výpočty výkonu provádějí za předpokladu jediné proměnné faktoru nebo prediktoru a jediné proměnné výsledku nebo výsledku. Zatímco bude zkoumána řada korelovaných výsledků, zaměříme se na změny v tvorbě mediátorů a úrovních exprese enzymů. Níže uvedené výpočty naznačují, že jsme se rozhodli zachytit klinicky významné účinky potenciálně důležitých vysvětlujících proměnných s přijatelnou nebo vysokou silou.

i. Biochemické koncové body – Síla je založena na párových t-testech porovnávajících kontinuální měření odezvy mezi léčbou a placebem. Předpokládáme, že bude k dispozici 40 subjektů po započítání 20% míry opuštění našeho původního vzorku 50 subjektů. Pro koncový bod produkce leukotrienu leukocyty výpočty síly naznačovaly, že budeme mít 80% schopnost detekovat skutečný rozdíl mezi subjektem 0,8 SD v rámci subjektu mezi léčbou a placebem s hodnotou α 0/05. Na základě našich předchozích studií předpokládáme variační koeficient v rámci subjektu (CV) 13 % pro generaci LTC4. To se promítne do přibližného detekovatelného rozdílu od 10,5 % v těchto parametrech. Použití párového oboustranného t-testu a předchozích odhadů střední hodnoty (směrodatná odchylka) pro placebo 0,001464 ( .002268) a pro olej z brutnáku lékařského .000289( .000709) , potřebovali bychom 40 subjektů pro 80-90% sílu na hladině významnosti 0,05, abychom detekovali změnu v transkriptu LTC4S, proteinu a enzymatické aktivitě o 50 % mezi rameny s placebem a brutnákem.

b. Plán analýzy – zpočátku představíme popisné statistiky (průměr, směrodatná odchylka, rozmezí) pro všechny koncové body léčebným skupinám a skupinám s placebem. Uvedeme také grafické grafy všech měření napříč studií a pro každou skupinu v každém období. Pro zkříženou studii 2x2 porovnáme léčbu a kontrolu u každého koncového bodu zvlášť pomocí zobecněného smíšeného modelového přístupu s prediktory: skupina (sekvence), pacient vnořený do skupiny jako náhodný efekt, období (dichotomické), léčba (dichotomické ) a sezónnost (dichotomická) s nestrukturovanou kovariancí. K posouzení dobré shody použijeme smíšenou modelovou diagnostiku, jako jsou reziduální grafy.