Oli di semi di borragine ed echium per l'asma (Borage)

Per valutare i meccanismi mediante i quali l'olio di semi di borragine e l'olio di semi di echium bloccano la generazione di mediatori nell'asma, abbiamo eseguito un progetto di sperimentazione incrociata per ridurre il numero di pazienti necessari per lo studio. Ogni periodo di trattamento era di sei settimane con un periodo di sospensione di sei settimane. Per semplicità, tutti i calcoli di potenza vengono effettuati assumendo un singolo fattore o variabile predittiva e un singolo risultato o variabile di esito. Ci siamo concentrati sui cambiamenti nella generazione del mediatore da parte delle cellule effettrici. I calcoli di seguito suggeriscono che abbiamo la risoluzione di raccogliere effetti clinicamente significativi di variabili esplicative potenzialmente importanti con potenza accettabile o elevata.

1. Disegno dello studio Gli obiettivi erano esaminare i meccanismi alla base degli effetti dell'olio di semi di borragine e dell'olio di semi di echium sulla produzione di mediatori proinfiammatori da parte dei leucociti effettori.

Nel braccio di trattamento, i soggetti hanno consumato 4,0 g/giorno di olio di semi di borragine e 7,0 g/giorno di olio di semi di echium (contenenti un totale di ~1,6 g/giorno di GLA e ~0,9 g/giorno di SDA). Gli oli erano confezionati in capsule ciascuna delle quali conteneva 1 grammo di olio. Pertanto i soggetti ingeriranno 10 capsule al giorno (3 al mattino, 3 al pomeriggio e 4 alla sera) durante i pasti. Nel braccio placebo, i soggetti hanno assunto capsule corrispondenti contenenti olio di mais; tre capsule da 1 grammo al mattino e al pomeriggio e quattro alla sera, durante i pasti.

Lo studio è iniziato con una visita di screening. Tutti i soggetti avevano asma diagnosticato dal medico. Tutti hanno eseguito una serie di misurazioni della funzione polmonare al basale. Sono entrati in un periodo di rodaggio di 2 settimane durante il quale hanno tenuto un diario dei picchi di flusso, dei sintomi dell'asma e dell'uso di beta agonisti. I soggetti sono stati istruiti sulla tecnica del flusso di picco e gli è stato chiesto di eseguire tre manovre ogni volta. La manovra è stata ritenuta tecnicamente sufficiente se la variazione dei valori ottenuti sui tre tentativi è pari al 10% l'uno dall'altro e il valore più alto è stato registrato su un diario. I soggetti i cui diari erano completi > 80% sono entrati nello studio e sono stati assegnati in modo casuale al trattamento attivo o al placebo. La spirometria è stata ripetuta. Il sangue è stato prelevato per la composizione degli acidi grassi del plasma e dei leucociti, la generazione di LT e il DNA per la genotipizzazione nel locus LTC4S. Ai soggetti sono stati forniti diari di picco di flusso, istruiti sulle prestazioni appropriate o sulle manovre di picco di flusso e gli è stato chiesto di registrare ogni giorno il picco di flusso mattutino e serale (riflettendo ogni volta il migliore dei tre sforzi). Dopo tre settimane di trattamento, verranno raccolte le schede del diario e ripetuta la spirometria. Dopo sei settimane di trattamento, è stato prelevato il sangue per il monitoraggio della sicurezza, per le misurazioni degli acidi grassi nel plasma e nei leucociti e per le analisi funzionali. La spirometria è stata ripetuta. I soggetti sono quindi entrati in un periodo di washout di sei settimane. Due settimane prima della fine di questo periodo ricominciarono a tenere le schede del diario. Al termine del periodo di washout di 6 settimane sono entrati nella fase di trattamento incrociato (sei settimane) che ha seguito lo stesso protocollo del primo periodo di trattamento con valutazione delle analisi degli acidi grassi, studi di funzionalità cellulare, monitoraggio della sicurezza e spirometria. Il test di gravidanza è stato eseguito prima e dopo ogni periodo di trattamento. Le schede dei latticini (con i risultati del monitoraggio del picco di flusso) saranno raccolte ad ogni visita (intervalli di 3 settimane durante i bracci di trattamento placebo e attivo dello studio).

3. Analisi statistiche

UN. Calcoli di potenza - Per semplicità, tutti i calcoli di potenza vengono effettuati assumendo un singolo fattore o variabile predittiva e un singolo risultato o variabile di esito. Mentre saranno studiati numerosi risultati correlati, ci concentreremo sui cambiamenti nella generazione del mediatore e sui livelli di espressione enzimatica. I calcoli di seguito suggeriscono che abbiamo la risoluzione di raccogliere effetti clinicamente significativi di variabili esplicative potenzialmente importanti con potenza accettabile o elevata.

io. Endpoint biochimici - Il potere si basa su t-test accoppiati che confrontano misure continue di risposta tra trattamento e placebo. Assumiamo che 40 soggetti saranno disponibili dopo aver consentito un tasso di abbandono del 20% dal nostro campione originale di 50 soggetti. Per l'endpoint della produzione di leucotrieni da parte dei leucociti, i calcoli della potenza hanno suggerito che avremo l'80% di potenza per rilevare una vera differenza all'interno del soggetto di 0,8 della SD all'interno del soggetto tra trattamento e placebo con un valore α di 0/05. Sulla base dei nostri studi precedenti, assumiamo un coefficiente di variazione (CV) all'interno del soggetto del 13% per la generazione di LTC4. Ciò si tradurrà in una differenza rilevabile approssimativa dal 10,5% in questi parametri. Utilizzando un t-test a due code accoppiato e stime della media precedente (deviazione standard) per il placebo di 0,001464 ( .002268) e per l'olio di borragine di .000289( .000709) , avremmo bisogno di 40 soggetti per una potenza dell'80-90% a un livello di significatività di 0,05 per rilevare un cambiamento nella trascrizione LTC4S, nelle proteine ​​e nell'attività enzimatica del 50% tra i bracci placebo e borragine.

B. Piano di analisi - Inizialmente, presenteremo statistiche descrittive (media, deviazione standard, intervallo) per tutti gli endpoint ai gruppi di trattamento e placebo. Presenteremo anche grafici di tutte le misure in tutto lo studio e per ogni gruppo all'interno di ogni periodo. Per lo studio crossover 2x2, confronteremo separatamente il trattamento e il controllo su ciascun endpoint impiegando un approccio di modello misto generalizzato con i predittori: gruppo (sequenza), paziente annidato all'interno del gruppo come effetto casuale, periodo (dicotomico), trattamento (dicotomico ), e stagionalità (dicotomica), con covarianza non strutturata. Utilizzeremo la diagnostica del modello misto come i grafici residui per valutare la bontà dell'adattamento.