Óleos de semente de borragem e echium para asma (Borage)

Para avaliar os mecanismos pelos quais o óleo de semente de borragem e o óleo de semente de echium bloqueiam a geração de mediadores na asma, realizamos um projeto de estudo cruzado para reduzir o número de pacientes necessários para o estudo. Cada período de tratamento foi de seis semanas com um período de washout de seis semanas. Para simplificar, todos os cálculos de poder são feitos assumindo um único fator ou variável preditora e um único resultado ou variável de resultado. Nós nos concentramos em mudanças na geração de mediadores por células efetoras. Os cálculos abaixo sugerem que temos resolução para captar efeitos clinicamente significativos de variáveis ​​explicativas potencialmente importantes com poder aceitável ou alto.

1. Desenho do estudo Os objetivos foram examinar os mecanismos subjacentes aos efeitos do óleo de semente de borragem e óleo de semente de echium na produção de mediadores pró-inflamatórios por leucócitos efetores.

No braço de tratamento, os indivíduos consumiram 4,0 g/dia de óleo de semente de borragem e 7,0 g/dia de óleo de semente de echium (contendo totais de ~1,6 g/dia de GLA e ~0,9 g/dia de SDA). Os óleos foram embalados em cápsulas, cada uma contendo 1 grama de óleo. Portanto, os indivíduos irão ingerir 10 cápsulas por dia (3 pela manhã, 3 à tarde e 4 à noite) com as refeições. No braço do placebo, os indivíduos tomaram cápsulas correspondentes contendo óleo de milho; três cápsulas de 1 grama pela manhã e à tarde, e quatro à noite, com as refeições.

O estudo começou com uma visita de triagem. Todos os indivíduos tinham asma diagnosticada pelo médico. Todos realizaram um conjunto inicial de medições da função pulmonar. Eles entraram em um período inicial de 2 semanas durante o qual mantiveram um diário de picos de fluxo, sintomas de asma e uso de beta-agonistas. Os indivíduos foram instruídos na técnica de pico de fluxo e solicitados a realizar três manobras de cada vez. A manobra foi considerada tecnicamente suficiente se a variação dos valores obtidos nas três tentativas for de 10% entre si, sendo o maior valor registrado em diário. Indivíduos cujos diários estavam > 80% completos entraram no estudo e foram designados aleatoriamente para tratamento ativo ou placebo. A espirometria foi repetida. O sangue foi coletado para composição de ácidos graxos do plasma e leucócitos, geração de LT e DNA para genotipagem no locus LTC4S. Os indivíduos receberam diários de pico de fluxo, instruídos sobre o desempenho apropriado ou manobras de pico de fluxo e solicitados a registrar o pico de fluxo matinal e noturno todos os dias (refletindo o melhor de três esforços de cada vez). Após três semanas de tratamento, os cartões diários serão coletados e a espirometria repetida. Após seis semanas de tratamento, o sangue foi coletado para monitoramento de segurança, para medições de ácidos graxos no plasma e leucócitos e para análises funcionais. A espirometria foi repetida. Os indivíduos então entraram em um período de washout de seis semanas. Duas semanas antes do final desse período, eles começaram novamente a manter os cartões diários. Na conclusão do período de washout de 6 semanas, eles entraram na fase de tratamento cruzado (seis semanas), que seguiu o mesmo protocolo do primeiro período de tratamento com avaliação de análises de ácidos graxos, estudos de função celular, monitoramento de segurança e espirometria. O teste de gravidez foi realizado antes e depois de cada período de tratamento. Cartões de laticínios (com resultados de monitoramento de pico de fluxo) serão coletados em cada visita (intervalos de 3 semanas durante o placebo e os braços de tratamento ativo do estudo).

3. Análises Estatísticas

a. Cálculos de poder - Para simplificar, todos os cálculos de poder são feitos assumindo um único fator ou variável preditora e um único resultado ou variável de resultado. Embora vários resultados correlacionados sejam investigados, vamos nos concentrar nas mudanças na geração de mediadores e nos níveis de expressão enzimática. Os cálculos abaixo sugerem que temos resolução para captar efeitos clinicamente significativos de variáveis ​​explicativas potencialmente importantes com poder aceitável ou alto.

eu. Pontos finais bioquímicos - O poder é baseado em testes t pareados comparando medidas contínuas de resposta entre tratamento e placebo. Assumimos que 40 indivíduos estarão disponíveis após permitir uma taxa de desistência de 20% de nossa amostra original de 50 indivíduos. Para o ponto final da produção de leucotrieno por leucócitos, os cálculos de poder sugeriram que teremos 80% de poder para detectar uma verdadeira diferença dentro do sujeito de 0,8 do SD dentro do sujeito entre o tratamento e o placebo com um valor α de 0/05. Com base em nossos estudos anteriores, assumimos um coeficiente de variação (CV) dentro do assunto de 13% para a geração de LTC4. Isso se traduzirá em uma diferença detectável aproximada de 10,5% nesses parâmetros. Usando um teste t bilateral pareado e estimativas médias anteriores (desvio padrão) para o placebo de 0,001464 (0,002268) e para o óleo de borragem de 0,000289 ( .000709) , precisaríamos de 40 indivíduos para um poder de 80-90% a um nível de significância de 0,05 para detectar uma alteração no transcrito LTC4S, proteína e atividade enzimática de 50% entre os braços placebo e borragem.

b. Plano de análise - Inicialmente, apresentaremos estatísticas descritivas (média, desvio padrão, intervalo) para todos os desfechos para os grupos de tratamento e placebo. Também apresentaremos gráficos de todas as medidas ao longo do estudo e para cada grupo dentro de cada período. Para o estudo cruzado 2x2, compararemos o tratamento e o controle em cada endpoint separadamente, empregando uma abordagem de modelo misto generalizado com os preditores: grupo (sequência), paciente aninhado dentro do grupo como um efeito aleatório, período (dicotômico), tratamento (dicotômico ) e sazonalidade (dicotômica), com covariância não estruturada. Utilizaremos diagnósticos de modelos mistos, como gráficos residuais, para avaliar a qualidade do ajuste.