Aceites de semilla de borraja y echium para el asma (Borage)

Para evaluar los mecanismos por los cuales el aceite de semilla de borraja y el aceite de semilla de echium bloquean la generación de mediadores en el asma, realizamos un diseño de ensayo cruzado para reducir el número de pacientes necesarios para el estudio. Cada período de tratamiento fue de seis semanas con un período de lavado de seis semanas. Para simplificar, todos los cálculos de potencia se realizan asumiendo un solo factor o variable predictora y un solo resultado o variable de resultado. Nos centramos en los cambios en la generación de mediadores por parte de las células efectoras. Los cálculos a continuación sugieren que tenemos resolución para detectar efectos clínicamente significativos de variables explicativas potencialmente importantes con un poder aceptable o alto.

1. Diseño del estudio Los objetivos eran examinar los mecanismos subyacentes a los efectos del aceite de semilla de borraja y el aceite de semilla de echium en la producción de mediadores proinflamatorios por parte de los leucocitos efectores.

En el grupo de tratamiento, los sujetos consumieron 4,0 g/día de aceite de semilla de borraja y 7,0 g/día de aceite de semilla de echium (con un total de ~1,6 g/día de GLA y ~0,9 g/día de SDA). Los aceites se envasaron en cápsulas, cada una de las cuales contenía 1 gramo de aceite. Por lo tanto, los sujetos ingerirán 10 cápsulas al día (3 por la mañana, 3 por la tarde y 4 por la noche) con las comidas. En el grupo de placebo, los sujetos tomaron cápsulas iguales que contenían aceite de maíz; tres cápsulas de 1 gramo por la mañana y por la tarde, y cuatro por la noche, con las comidas.

El estudio comenzó con una visita de selección. Todos los sujetos tenían asma diagnosticada por un médico. Todos realizaron un conjunto de referencia de mediciones de la función pulmonar. Entraron en un período de preinclusión de 2 semanas durante el cual mantuvieron un diario de flujos máximos, síntomas de asma y uso de agonistas beta. Se instruyó a los sujetos en la técnica de flujo máximo y se les pidió que realizaran tres maniobras cada vez. La maniobra se consideró técnicamente suficiente si la variación de los valores obtenidos en los tres intentos es del 10% entre sí, y el valor más alto se registró en un diario. Los sujetos cuyos diarios estaban > 80% completos ingresaron al estudio y fueron asignados aleatoriamente a tratamiento activo o placebo. Se repitió la espirometría. Se extrajo sangre para determinar la composición de ácidos grasos del plasma y los leucocitos, la generación de LT y el ADN para el genotipado en el locus LTC4S. A los sujetos se les proporcionaron diarios de flujo máximo, se les instruyó en el desempeño apropiado o en las maniobras de flujo máximo, y se les pidió que registraran el flujo máximo de la mañana y la tarde cada día (reflejando el mejor de tres esfuerzos cada vez). Después de tres semanas de tratamiento, se recogerán las fichas del diario y se repetirá la espirometría. Después de seis semanas de tratamiento, se extrajo sangre para el control de seguridad, para las mediciones de ácidos grasos en plasma y leucocitos, y para los análisis funcionales. Se repitió la espirometría. Luego, los sujetos entraron en un período de lavado de seis semanas. Dos semanas antes del final de este período, nuevamente comenzaron a llevar registros diarios. Al finalizar el período de lavado de 6 semanas, ingresaron a la fase de tratamiento cruzado (seis semanas) que siguió el mismo protocolo que el primer período de tratamiento con evaluación de análisis de ácidos grasos, estudios de función celular, monitoreo de seguridad y espirometría. Se realizaron pruebas de embarazo antes y después de cada período de tratamiento. Se recopilarán tarjetas de productos lácteos (con los resultados del control del flujo máximo) en cada visita (intervalos de 3 semanas durante los brazos del estudio con placebo y tratamiento activo).

3. Análisis estadísticos

a. Cálculos de potencia: para simplificar, todos los cálculos de potencia se realizan asumiendo un solo factor o variable predictora y un solo resultado o variable de resultado. Si bien se investigarán varios resultados correlacionados, nos centraremos en los cambios en la generación de mediadores y los niveles de expresión de enzimas. Los cálculos a continuación sugieren que tenemos resolución para detectar efectos clínicamente significativos de variables explicativas potencialmente importantes con un poder aceptable o alto.

i. Criterios de valoración bioquímicos: la potencia se basa en pruebas t pareadas que comparan medidas continuas de respuesta entre el tratamiento y el placebo. Suponemos que habrá 40 sujetos disponibles después de permitir una tasa de abandono del 20 % de nuestra muestra original de 50 sujetos. Para el criterio de valoración de la producción de leucotrienos por los leucocitos, los cálculos de potencia sugirieron que tendremos una potencia del 80 % para detectar una diferencia real dentro del sujeto de 0,8 de la DE dentro del sujeto entre el tratamiento y el placebo con un valor α de 0/05. Sobre la base de nuestros estudios anteriores, asumimos un coeficiente de variación (CV) dentro del sujeto del 13 % para la generación de LTC4. Esto se traducirá en una diferencia detectable aproximada del 10,5 % en estos parámetros. Usando una prueba t de dos caras pareada y estimaciones previas de la media (desviación estándar) para el placebo de 0,001464 ( .002268) y para el aceite de borraja de .000289( .000709) , necesitaríamos 40 sujetos para una potencia del 80-90 % a un nivel de significación de 0,05 para detectar un cambio en el transcrito LTC4S, la proteína y la actividad enzimática del 50 % entre los brazos de placebo y de borraja.

b. Plan de análisis: inicialmente, presentaremos estadísticas descriptivas (media, desviación estándar, rango) para todos los criterios de valoración para los grupos de tratamiento y placebo. También presentaremos gráficos de todas las medidas a lo largo del estudio y para cada grupo dentro de cada período. Para el estudio cruzado 2x2, compararemos el tratamiento y el control en cada criterio de valoración por separado empleando un enfoque de modelo mixto generalizado con los predictores: grupo (secuencia), paciente anidado dentro del grupo como efecto aleatorio, período (dicotómico), tratamiento (dicotómico) ), y estacionalidad (dicotómica), con covarianza no estructurada. Utilizaremos diagnósticos de modelos mixtos, como gráficos residuales, para evaluar la bondad del ajuste.