Масла огуречника и эхия при астме (Borage)

Чтобы оценить механизмы, с помощью которых масло семян огуречника и масло семян эхиума блокируют выработку медиаторов при астме, мы провели перекрестное исследование, чтобы уменьшить количество пациентов, необходимых для исследования. Каждый период лечения составлял шесть недель с шестинедельным периодом вымывания. Для простоты все расчеты мощности производятся с учетом одного фактора или предиктора и одного результата или исходной переменной. Мы сосредоточились на изменениях в генерации медиаторов эффекторными клетками. Приведенные ниже расчеты предполагают, что у нас есть разрешение улавливать клинически значимые эффекты потенциально важных объясняющих переменных с приемлемой или высокой мощностью.

1. Дизайн исследования. Целью исследования было изучение механизмов, лежащих в основе эффектов масла семян бурачника и масла семян эхиума на выработку провоспалительных медиаторов эффекторными лейкоцитами.

В группе лечения испытуемые потребляли 4,0 г/день масла семян огуречника и 7,0 г/день масла семян эхиума (содержащее в общей сложности ~1,6 г/день ГЛК и ~0,9 г/день SDA). Масла были упакованы в капсулы, каждая из которых содержала 1 грамм масла. Поэтому субъекты будут принимать по 10 капсул в день (3 утром, 3 днем ​​и 4 вечером) во время еды. В группе плацебо испытуемые принимали соответствующие капсулы, содержащие кукурузное масло; три 1-граммовые капсулы утром и днем ​​и четыре вечером во время еды.

Исследование началось со скринингового визита. У всех испытуемых была диагностированная врачом астма. Все выполняли базовый набор измерений функции легких. Они вошли в двухнедельный вводной период, в течение которого они вели дневник пикфлоуметрии, симптомов астмы и использования бета-агонистов. Субъектов обучали технике пикфлоуметрии и каждый раз просили выполнять три маневра. Маневр считался технически достаточным, если разброс значений, полученных в трех попытках, составлял 10% друг от друга, а наибольшее значение фиксировалось в дневнике. Субъекты, чьи дневники были заполнены > 80%, включались в исследование и были случайным образом распределены в группу активного лечения или плацебо. Повторялась спирометрия. Брали кровь на жирнокислотный состав плазмы и лейкоцитов, генерацию ЛТ и ДНК для генотипирования по локусу LTC4S. Субъектам были предоставлены дневники пикфлоуметрии, проинструктированы о соответствующих действиях или маневрах пикфлоуметрии, и их попросили записывать утренний и вечерний пикфлоуметрию каждый день (каждый раз отражая лучшие из трех усилий). После трех недель лечения будут собраны дневниковые карточки и повторена спирометрия. После шести недель лечения брали кровь для мониторинга безопасности, для измерения жирных кислот в плазме и лейкоцитах, а также для функциональных анализов. Повторялась спирометрия. Затем испытуемые вошли в шестинедельный период вымывания. За две недели до окончания этого периода снова начали вести дневниковые карточки. По завершении 6-недельного периода вымывания они перешли к фазе перекрестного лечения (шесть недель), которая следовала тому же протоколу, что и первый период лечения, с оценкой анализов жирных кислот, исследованиями клеточной функции, мониторингом безопасности и спирометрией. Тестирование на беременность проводили до и после каждого периода лечения. Молочные карты (с результатами мониторинга пиковой скорости потока) будут собираться при каждом посещении (с 3-недельными интервалами в группах плацебо и активного лечения).

3. Статистический анализ

а. Расчеты мощности. Для простоты все расчеты мощности выполняются с учетом одного фактора или переменной-предиктора и одного результата или переменной результата. Хотя будет изучен ряд коррелированных результатов, мы сосредоточимся на изменениях в генерации медиаторов и уровнях экспрессии ферментов. Приведенные ниже расчеты предполагают, что у нас есть разрешение улавливать клинически значимые эффекты потенциально важных объясняющих переменных с приемлемой или высокой мощностью.

я. Биохимические конечные точки - Мощность основана на парных t-тестах, сравнивающих непрерывные измерения ответа между лечением и плацебо. Мы предполагаем, что 40 субъектов будут доступны после учета 20% отсева из нашей первоначальной выборки из 50 субъектов. Для конечной точки производства лейкотриенов лейкоцитами расчеты мощности показали, что у нас будет 80% мощность для обнаружения истинной разницы внутри субъекта в 0,8 от стандартного отклонения внутри субъекта между лечением и плацебо со значением α 0/05. На основании наших предыдущих исследований мы предполагаем, что внутрисубъектный коэффициент вариации (CV) составляет 13% для поколения LTC4. Это приведет к приблизительной обнаруживаемой разнице в этих параметрах от 10,5%. Используя парный двусторонний t-критерий и априорные оценки среднего (стандартное отклонение) для плацебо, равные 0,001464. ( .002268) и масло огуречника .000289( .000709) , нам потребуется 40 субъектов для мощности 80-90% при уровне значимости 0,05, чтобы обнаружить изменение в транскрипте, белке и ферментативной активности LTC4S на 50% между группами плацебо и огуречника.

б. План анализа. Первоначально мы представим описательную статистику (среднее значение, стандартное отклонение, диапазон) для всех конечных точек в группах лечения и плацебо. Мы также представим графические графики всех показателей в рамках исследования и для каждой группы в течение каждого периода. Для перекрестного исследования 2x2 мы сравним лечение и контроль по каждой конечной точке отдельно, используя подход обобщенной смешанной модели с предикторами: группа (последовательность), пациент, вложенный в группу как случайный эффект, период (дихотомический), лечение (дихотомический). ) и сезонность (дихотомическая) с неструктурированной ковариацией. Мы будем использовать диагностику смешанной модели, такую ​​как остаточные графики, для оценки соответствия.