Vliv kouření na apoptózu u parodontitidy

Pozadí:

Mechanismy odpovědné za poškození gingivální tkáně nejsou dostatečně pochopeny a mohou se na nich podílet jak imunitně zprostředkované reakce, tak přímé cytopatické účinky bakterií. Na základě přímého účinku bakterií v buněčných kulturách bylo navrženo, že apoptóza by mohla hrát důležitou roli u parodontitidy (Chen 1994).

Programovaná buněčná smrt (apoptóza) je normální fyziologický proces, který přispívá k udržení tkáňové homeostázy. Proces apoptózy může být modulován různými stimulačními hormony, cytokiny, růstovými faktory, infekcemi a imunitními reakcemi (Renehan et al. 2001).

Kromě jiných faktorů se ukázalo, že základní regulační roli v apoptóze hrají produkty dvou genů, které kódují protein p53 a Bcl-2. P53 je proteinový produkt tumor-supresorového genu a exprese P53 může indukovat apoptózu. Tento protein se také podílí na regulaci tkáňové dynamiky a specificky se předpokládá, že indukuje apoptózu v terminálně diferencovaných buňkách, včetně zánětlivých buněk (Bulut et al.2006).

Fibroblast je typ buňky, která syntetizuje extracelulární a kolagen v pojivové tkáni. Hraje klíčovou roli při hojení ran. Fibroblasty jsou nejběžnější buňky v pojivové tkáni. Hlavní funkcí fibroblastů je udržovat strukturální integritu pojivové tkáně kontinuální sekrecí prekurzorů extracelulární matrix. bylo hlášeno, že hladiny apoptózy se zvýšily u gingivitidy a parodontitidy (Jarenberg et al. 2002).

Kouření cigaret je rizikovým faktorem mnoha nemocí a nedávné důkazy naznačují, že kouření nepříznivě ovlivňuje zdraví parodontu. Řada epidemiologických studií prokázala silnou souvislost mezi kouřením a prevalencí a závažností parodontitidy (Bostrom et al. 1998). Zatímco patogeneze parodontitidy u kuřáků je špatně pochopena, existují údaje, které naznačují, že účinky kouření na periodontální tkáně zahrnují defekty ve funkci neutrofilů, zhoršené reakce sérových protilátek na periodontální patogeny a potenciálně sníženou funkci gingiválních fibroblastů (Shivanaikar et al. 2001). Kuřáci jsou považováni za vysoce rizikovou skupinu pro parodontitidu a kuřácká anamnéza je užitečným klinickým prediktorem budoucí aktivity onemocnění (Hanokia et al. 2000).

Cíle studie:

• Zkoumání vlivu kouření na apoptózu fibroblastů u kuřáků s parodontitidou ve srovnání s nekuřáky s parodontitidou pomocí imunohistochemických metod.
• Srovnání úrovní apoptózy gingiválních fibroblastů mezi chronickou a agresivní parodontitidou.

Materiály a metody:

K účasti na této studii bude pozváno celkem 80 subjektů z řad pacientů doporučených na Ústav parodontologie Fakulty zubního lékařství Univerzity v Damašku. Studii bude schvalovat zvláštní Revizní komise. Subjekty budou vybrány podle specifických kritérií pro zařazení po vyplnění lékařských a zubních dotazníků. Pacienti podepíší formulář souhlasu poté, co budou informováni o povaze studie.

Výběr pacientů bude proveden podle kritérií schválených v roce 1999 mezinárodním světovým workshopem pro klasifikační systém onemocnění a stavů parodontu (Armitage 1999) za použití pěti klinických parametrů a snímků plných úst nebo panoramatických rentgenových snímků pro diagnostiku.

Předměty budou rozděleny do čtyř skupin:

• Skupina s kuřáckou chronickou parodontitidou (ChP-S): zahrnuje 20 pacientů, kteří jsou kuřáci a jsou ve věku > 45 let a mají přítomnost ≥ 2 nesousedících míst na kvadrant, která nebyla prvními moláry nebo řezáky, s hloubkou sondy (PD) ≥ 5 mm , které při jemném sondování krvácejí. Prokázaná radiografická ztráta kostní hmoty ≥ 30 % délky kořene, pacient se špatnou ústní hygienou, množství nahromaděného plaku úměrné množství klinické úrovně přilnutí (CAL)
• Nekuřáci Skupina s chronickou parodontitidou (ChP-NS): zahrnuje 20 pacientů stejného pohlaví, kteří jsou nekuřáci a mají chronickou parodontitidu.
• Skupina Smoking Aggressive Parodontitis (AgP-S): zahrnuje 20 pacientů, kteří jsou kuřáci a jsou ve věku < 35 let a mají diagnostikovanou rychlou ztrátu úponu s hloubkou periodontální kapsy (PD) > 4 mm kolem nejméně tří zubů jiných než prvních molárů a řezáků. Rychlá destrukce kosti (>50% ztráta kosti na nemocných místech). Slabý vztah mezi zubním plakem a závažností zánětu dásní.
• Nekuřácká skupina s agresivní parodontitidou (AgP-NS): zahrnuje 20 pacientů stejného věku a pohlaví, kteří jsou nekuřáci a mají agresivní parodontitidu.

Klinická měření:

Pro záznam periodontálních indexů na šesti místech na zub bude použita standardní parodontální sonda. Mezi vyšetřované klinické parametry patří krvácení při sondování (BOP), index plaku (PI), klinická ztráta přilnutí (CAL) a hloubka periodontální kapsy (PPD) a gingivální index (GI).

Odběr a analýza biopsie

• Vzorky biopsie budou odebírány od pacientů během chirurgického ošetření (kyretáž s otevřenou chlopní), kdy je biopsie odebírána ze spodní oblasti papily.
• Vzorky budou umístěny v 10% formalínu.
• Vzorky budou následně instalovány do parafínu.
• Vzorky budou analyzovány pomocí p53 monoklonální myší anti-lidské protilátky.