Wpływ palenia na apoptozę w zapaleniu przyzębia

Tło:

Mechanizmy odpowiedzialne za uszkodzenie tkanki dziąseł są słabo poznane i mogą być zaangażowane zarówno reakcje immunologiczne, jak i bezpośrednie działanie cytopatyczne bakterii. Na podstawie bezpośredniego wpływu bakterii w hodowlach komórkowych zasugerowano, że apoptoza może odgrywać ważną rolę w zapaleniu przyzębia (Chen 1994).

Zaprogramowana śmierć komórki (apoptoza) jest normalnym procesem fizjologicznym, który przyczynia się do utrzymania homeostazy tkanek. Proces apoptozy może być modulowany przez różne hormony stymulujące, cytokiny, czynniki wzrostu, infekcje i odpowiedzi immunologiczne (Renehan et al. 2001).

Wśród innych czynników wykazano, że produkty dwóch genów kodujących białka p53 i Bcl-2 odgrywają fundamentalną rolę regulacyjną w apoptozie. P53 jest produktem białkowym genu supresorowego guza, a ekspresja P53 może indukować apoptozę. Białko to bierze również udział w regulacji dynamiki tkanek i uważa się, że indukuje apoptozę w komórkach ostatecznie zróżnicowanych, w tym w komórkach zapalnych (Bulut i wsp. 2006).

Fibroblast jest rodzajem komórki, która syntetyzuje zewnątrzkomórkową i kolagen w tkance łącznej. Odgrywa kluczową rolę w gojeniu się ran. Fibroblasty są najczęściej występującymi komórkami tkanki łącznej. Główną funkcją fibroblastów jest utrzymanie integralności strukturalnej tkanki łącznej poprzez ciągłe wydzielanie prekursorów macierzy pozakomórkowej. stwierdzono, że poziom apoptozy wzrastał w przypadku zapalenia dziąseł i przyzębia (Jarenberg et al. 2002).

Palenie papierosów jest czynnikiem ryzyka wielu chorób, a ostatnie dowody wskazują, że palenie niekorzystnie wpływa na zdrowie przyzębia. Szereg badań epidemiologicznych wykazało silny związek między paleniem a występowaniem i ciężkością zapalenia przyzębia (Bostrom i in. 1998). Podczas gdy patogeneza zapalenia przyzębia u palaczy jest słabo poznana, istnieją dane sugerujące, że wpływ palenia na tkanki przyzębia obejmuje defekty funkcji neutrofili, upośledzoną odpowiedź przeciwciał w surowicy na patogeny przyzębia i potencjalnie zmniejszoną funkcję fibroblastów dziąseł (Shivanaikar i wsp. 2001). Palacze są uważani za grupę wysokiego ryzyka zapalenia przyzębia, a historia palenia jest użytecznym klinicznym predyktorem przyszłej aktywności choroby (Hanokia i wsp. 2000).

Cele badania:

• Badanie wpływu palenia tytoniu na apoptozę fibroblastów u palaczy z zapaleniem przyzębia w porównaniu z osobami niepalącymi z zapaleniem przyzębia metodami immunohistochemicznymi.
• Porównanie poziomów apoptozy fibroblastów dziąseł między przewlekłym i agresywnym zapaleniem przyzębia.

Materiały i metody:

W sumie 80 osób zostanie zaproszonych do udziału w tym badaniu spośród pacjentów skierowanych do Kliniki Periodontologii Wydziału Stomatologii Uniwersytetu w Damaszku. Badanie zostanie zatwierdzone przez specjalną Komisję Rewizyjną. Osoby badane będą rekrutowane zgodnie z określonymi kryteriami włączenia po wypełnieniu kwestionariuszy historii medycznej i dentystycznej. Pacjenci podpisują formularz zgody po poinformowaniu ich o charakterze badania.

Wybór pacjentów zostanie dokonany zgodnie z kryteriami zatwierdzonymi przez międzynarodowe światowe warsztaty w 1999 r. dotyczące systemu klasyfikacji chorób i schorzeń przyzębia (Armitage 1999) przy użyciu pięciu parametrów klinicznych oraz pełnych lub panoramicznych zdjęć rentgenowskich w celu postawienia diagnozy.

Przedmioty zostaną podzielone na cztery grupy:

• Palenie tytoniu Grupa przewlekłego zapalenia przyzębia (ChP-S): obejmuje 20 pacjentów palących w wieku > 45 lat, u których w kwadrancie występują ≥ 2 niesąsiadujące miejsca, które nie były pierwszymi zębami trzonowymi lub siekaczami, z głębokością sondowania (PD) ≥ 5 mm , które krwawią przy delikatnym sondowaniu. Stwierdzony radiograficznie ubytek kości ≥30% długości korzenia, pacjent ze złą higieną jamy ustnej, ilość nagromadzonej płytki nazębnej proporcjonalna do wielkości przyczepu klinicznego (CAL)
• Grupa niepalących z przewlekłym zapaleniem przyzębia (ChP-NS): obejmuje 20 pacjentów dobranych pod względem wieku i płci, którzy nie palą i cierpią na przewlekłe zapalenie przyzębia.
• Grupa palących agresywnych zapaleń przyzębia (AgP-S): obejmuje 20 palących pacjentów w wieku < 35 lat, u których zdiagnozowano szybką utratę przyczepu z głębokością kieszonek przyzębnych (PD) > 4 mm wokół co najmniej trzech zębów innych niż pierwsze zęby trzonowe i siekacze. Szybka destrukcja kości (> 50% utrata kości w chorych miejscach). Słaby związek między płytką nazębną a nasileniem zapalenia dziąseł.
• Grupa niepalących z agresywnym zapaleniem przyzębia (AgP-NS): obejmuje 20 pacjentów dobranych pod względem wieku i płci, którzy nie palą i mają agresywne zapalenie przyzębia.

Pomiary kliniczne:

Do rejestracji wskaźników periodontologicznych w sześciu miejscach na ząb zostanie użyta standardowa sonda periodontologiczna. Badane parametry kliniczne obejmują krwawienie przy sondowaniu (BOP), wskaźnik płytki nazębnej (PI), kliniczną utratę przyczepu (CAL) oraz głębokość kieszonek przyzębnych (PPD) i wskaźnik dziąsłowy (GI).

Pobieranie i analiza biopsji

• Próbki do biopsji będą pobierane od pacjentów podczas leczenia chirurgicznego (kiretaż z otwartym płatem), polegającego na pobraniu biopsji z obszaru podstawy brodawki.
• Próbki zostaną umieszczone w 10% formalinie.
• Próbki zostaną następnie umieszczone w parafinie.
• Próbki będą analizowane za pomocą monoklonalnego mysiego przeciwciała p53 anty-ludzkiego.