Mechanismy diabetické nefropatie v Ekvádoru

1. Stanovení sociálních, environmentálních a biologických faktorů zapojených do diabetické nefropatie v Ekvádoru Výzkumníci budou studovat subjekty z obecné populace. Vyšetřovatelé budou kontaktovat komunitní a náboženské vůdce, aby pozvali dospělé subjekty z obecné populace k účasti na této studii a bude zapsáno 10 000 osob.

   Po výuce základních konceptů prevence diabetické nefropatie ve všech předmětech budou vyšetřovatelé shromažďovat demografická data, domovní podmínky a lokalizaci (venkovské, městské nebo v okolí města), počet lidí, kteří sdílejí domov, úroveň vzdělání, zaměstnání a ekonomickou situaci, osobní zdravotní pojištění, anamnéza zdravotních prohlídek, toxické návyky (alkohol, cigarety a návykové látky) a pohybové návyky. Vyšetřovatelé budou shromažďovat osobní a rodinné předchůdce diabetes mellitus, diabetické nefropatie, hypertenze, onemocnění ledvin, těhotenského diabetu, současné léčby a dalších chronických onemocnění. Vyšetřovatelé změří tělesnou hmotnost (kg), výšku (m) a vyšetřovatelé vypočítají index tělesné hmotnosti. Vyšetřovatelé budou také měřit krevní tlak, glykémii, glykosylovaný hemoglobin, mikroalbuminurii a proteinurii. Vyškolený personál vyplní dotazník osoby. Vyšetřovatelé budou dohlížet a sbírat data od 2 % vzorku.

2. Úloha proteinů extracelulární matrix a signalizace růstových faktorů u diabetické nefropatie

   1. Systémové studie a studie moči: proteiny účastnící se patogeneze diabetické nefropatie jako vaskulární endoteliální faktor A (VEGF) a koncentrace proteinu extracelulární matrix jako tenascin C (tenascin) budou měřeny komerčně dostupnými soupravami v plazmě a moči (v tomto pořadí). Vzorky budou získány od diabetiků s (n: 20) a bez diabetické nefropatie (n: 20) a od nediabetických subjektů (kontrol) z obecné populace (n: 2000). Stanovení sociálního, environmentálního a biologického faktoru bude dokončeno jako v cíli 1.
   2. Studie ledvinové tkáně: výzkumníci určí roli proteinu účastnícího se diabetické nefropatie, signalizace VEGF a tenascinu v:

I) Bude studována ledvinová tkáň zalitá v parafínu získaná z knihoven vzorků patologických laboratoří. Budou sbírány preparáty od nediabetiků (n: 10) a diabetiků s diabetickou nefropatií (n: 20) a bez diabetické nefropatie (n: 10). Úloha proteinů účastnících se diabetické nefropatie jako VEGF signalizace a tenascinu bude studována pomocí imunohistochemie a proximity link assay.

II) Budou studována sklíčka ledvin zalitých v parafínu od diabetiků s diabetickou nefropatií (n: 12), nediabetické kontroly (n: 6) s primární glomerulopatií jako onemocnění s minimální změnou a diabetických kontrol bez diabetické nefropatie (n: 6). Vyšetřovatelé budou přijímat pacienty s biopsií ledvin indikovanou a naplánovanou k provedení jejich lékaři. Po dokončení patologické diagnózy bude pro tuto studii použita část tkáně zalité zbytkem parafínu. Úloha proteinů podílejících se na diabetické nefropatii, signalizaci VEGF a tenascinu bude studována imunohistochemicky a pomocí proximity link assay. Moč a plazma budou odebrány před biopsií ledviny za účelem měření proteinové koncentrace potenciálně užitečných biomarkerů diabetické nefropatie; Budou kvantifikovány hladiny VEGF a tenascinu. Pacienti budou informováni a bude vyžadován podepsaný souhlas.

Glykémie bude měřena glukometrem a testovacím proužkem. Glykosylovaný hemoglobin A1c a mikroalbuminurie (albumin/kreatinin ve spotové moči) budou kvantifikovány pomocí přenosného přístroje (Siemens).

V podmínkách nalačno budou vyšetřovatelé zvažovat normální hodnoty glukózy v krvi < 99 mg %, prediabetes mezi 100 a 125 mg % a diabetes ≥ 126 mg %. V podmínkách bez hladovění budou hodnoty glukózy v krvi >200 mg% považovány za diabetes. Vyšetřovatelé budou považovat za normální hodnoty glykosylovaného hemoglobinu A1c < 5,6 %, prediabetes mezi 5,7 a 6,4 % a diabetes ≥ 6,5 %.

Vyšetřovatelé budou považovat za normální hodnoty albuminurie poměru albumin/kreatinin <29 mg/g, hodnoty mikroalbuminurie mezi 30 a 299 mg/g a hodnoty makroalbuminurie ≥300 mg/g. Proteinurie bude také hodnocena pomocí reaktivních proužků moči.

V případě nekonzistentních výsledků nebo hodnot mimo rozsah bude analýza opakována ve stejném vzorku nebo znovu analyzována standardním laboratorním vybavením a technikami.

Vyšetřovatelé budou považovat diabetickou nefropatii za přetrvávající proteinurii spojenou s diabetickou retinopatií a sníženou endogenní glomerulární filtrací (u subjektů bez diagnózy jiných onemocnění ledvin nebo močových cest). U diabetiků 1. typu bude diabetická nefropatie diagnostikována, pokud je anamnéza diabetu delší než 10 let před nástupem proteinurie; u diabetika typu 2, proteinurie spojené se sníženou rychlostí glomerulární filtrace v době diagnózy, budou vyšetřovatelé považovat za diabetickou nefropatii.

Ve všech vzorcích ledvin zalitých v parafínu budeme měřit expresi a lokalizaci proteinu. Vyšetřovatelé použijí soupravy, primární a sekundární protilátky komerčně dostupné k provedení imunohistochemie a testu proximitního spojení. Výzkumníci budou tyto experimenty provádět ve spolupráci s patologem.

Všechny subjekty rekrutované z obecné populace budou identifikovány jedinečným kódem. Číselný a velký kód bude v anketě a ve vzorových štítcích umístěn jako M0001 (M: město, číslo 0001: číslo osoby 0001). Data budou nahrána a uložena v zabezpečené databázi. Manipulaci s databází bude mít na starosti vyškolený personál. Na zadávání údajů budou dohlížet vyšetřovatelé. Vyšetřovatel alespoň jednou za 6 měsíců náhodně vybere 2% průzkum a porovná jej s informacemi nahranými v databázi. Kromě toho budou vyšetřovatelé analyzovat a hlásit všechna shromážděná data z průzkumů, i když jsou neúplná, úpravou parametrů analýzy neúplných.

Badatelé použijí nástroje deskriptivní statistiky k popisu skupin (průměr, směrodatná odchylka a standardní chyba nebo medián a mezikvartilní rozmezí). Pro skupinové srovnání bude použit nepárový T test, Mann Whitney nebo Fisherův test. ANOVA, Kruskal Wallis a Chi Square test budou provedeny pro porovnání nesrovnaných skupin; ke kvantifikaci asociace mezi dvěma proměnnými bude použit Pearsonův a Spearmanův korelační test. Pro predikci hodnoty z proměnných budou uvažovány jednoduché nebo vícenásobné regrese. Hodnota P <0,05 bude považována za významnou. Vzorek z obecné populace byl vypočten s ohledem na dospělou populaci ve věku 21-70 let v Ekvádoru.