Meccanismi di nefropatia diabetica in Ecuador

1. Determinazione del fattore sociale, ambientale e biologico implicato nella nefropatia diabetica in Ecuador Gli investigatori studieranno soggetti della popolazione generale. Gli investigatori contatteranno la comunità e i leader religiosi per invitare soggetti adulti della popolazione generale a partecipare a questo studio e saranno arruolate 10000 persone.

   Dopo aver insegnato i concetti di base sulla prevenzione della nefropatia diabetica in tutte le materie, i ricercatori raccoglieranno dati demografici, condizioni e localizzazione delle case (rurali, urbane o intorno alle città), numero di persone che condividono una casa, livello di istruzione, condizione occupazionale ed economica, personale assicurazione sanitaria, storia del controllo medico, abitudini tossiche (alcol, abuso di sigarette di sostanze che creano dipendenza) e abitudini di esercizi fisici. Gli investigatori raccoglieranno antecedenti personali e familiari di diabete mellito, nefropatia diabetica, ipertensione, malattie renali, diabete gestazionale, trattamenti in corso e altre malattie croniche. Gli investigatori misureranno il peso corporeo (Kg), l'altezza (m) e gli investigatori calcoleranno l'indice di massa corporea. Gli investigatori misureranno anche la pressione sanguigna, la glicemia, l'emoglobina glicosilata, la microalbuminuria e la proteinuria. Il personale addestrato compilerà il sondaggio della persona. Gli investigatori supervisioneranno e raccoglieranno dati dal 2% del campione.

2. Ruolo delle proteine ​​della matrice extracellulare e dei fattori di crescita nella nefropatia diabetica

   1. Studi sistemici e delle urine: le proteine ​​coinvolte nella patogenesi della nefropatia diabetica come il fattore A dell'endotelio vascolare (VEGF) e la proteina della matrice extracellulare come la concentrazione di tenascina C (tenascina) saranno misurate mediante kit disponibili in commercio nel plasma e nelle urine (rispettivamente). I campioni saranno ottenuti da diabetici con (n: 20) e senza nefropatia diabetica (n: 20) e da soggetti non diabetici (controlli) della popolazione generale (n: 2000). Le determinazioni del fattore sociale, ambientale e biologico saranno completate come nell'obiettivo 1.
   2. Studi sul tessuto renale: i ricercatori determineranno il ruolo delle proteine ​​coinvolte nella nefropatia diabetica, nella segnalazione del VEGF e nella tenascina in:

I) Verrà studiato il tessuto renale incluso in paraffina ottenuto dalle librerie di campioni dei laboratori di patologia. Saranno raccolti vetrini da non diabetici (n: 10) e diabetici con nefropatia diabetica (n: 20) e senza nefropatia diabetica (n: 10). Il ruolo delle proteine ​​coinvolte nella nefropatia diabetica come la segnalazione del VEGF e la tenascina sarà studiato mediante immunoistochimica e test di prossimità.

II) Saranno studiati vetrini renali inclusi in paraffina da diabetici con nefropatia diabetica (n: 12), controlli non diabetici (n: 6) con glomerulopatia primaria come malattia a cambiamento minimo e controlli diabetici senza nefropatia diabetica (n: 6). Gli investigatori recluteranno pazienti con biopsia renale indicata e programmata per essere eseguita dai loro medici. Dopo il completamento della diagnosi della patologia, per questo studio verrà utilizzato parte del tessuto residuo incluso in paraffina. Il ruolo delle proteine ​​coinvolte nella nefropatia diabetica, nella segnalazione del VEGF e nella tenascina sarà studiato mediante immunoistochimica e test di prossimità. L'urina e il plasma saranno raccolti prima della biopsia renale al fine di misurare la concentrazione proteica di biomarcatori potenzialmente utili della nefropatia diabetica; Verranno quantificati i livelli di VEGF e tenascina. I pazienti saranno informati e sarà richiesto il consenso firmato.

La glicemia sarà misurata dal glucometro e dalla striscia reattiva. L'emoglobina glicosilata A1c e la microalbuminuria (albumina/creatinina nelle urine spot) saranno quantificate utilizzando la macchina portatile (Siemens).

In condizioni di digiuno, i ricercatori considereranno valori normali di glicemia <99 mg%, pre-diabete tra 100 e 125 mg% e diabete ≥126 mg%. In condizioni di non digiuno valori di glicemia >200mg% saranno considerati diabete. Gli investigatori riterranno valori normali di emoglobina A1c glicosilata <5,6%, pre-diabete tra 5,7 e 6,4% e diabete ≥6,5%.

Gli investigatori riterranno valori normali di albuminuria del rapporto albumina/creatinina <29 mg/g, valori di microalbuminuria compresi tra 30 e 299 mg/g e valori di macroalbuminuria ≥300 mg/g. La proteinuria sarà valutata anche mediante strisce di urina reattiva.

In caso di risultati incoerenti o valori fuori range, l'analisi verrà ripetuta nello stesso campione o riesaminata con attrezzature e tecniche di laboratorio standard.

Gli investigatori considereranno la nefropatia diabetica come proteinuria persistente associata a retinopatia diabetica e ridotta velocità di filtrazione glomerulare endogena (in soggetti senza diagnosi di altre malattie renali o del tratto urinario). Nei diabetici di tipo 1, la nefropatia diabetica sarà diagnosticata se la storia del diabete è più lunga di 10 anni prima dell'inizio della proteinuria; nel diabete di tipo 2, proteinuria associata a una ridotta velocità di filtrazione glomerulare al momento della diagnosi, i ricercatori riterranno nefropatia diabetica.

In tutti i campioni di rene inclusi in paraffina misureremo l'espressione e la localizzazione della proteina. Gli investigatori utilizzeranno kit, anticorpi primari e secondari disponibili in commercio per eseguire l'immunoistochimica e il test del collegamento di prossimità. Gli investigatori eseguiranno questi esperimenti in collaborazione con il patologo.

Tutti i soggetti reclutati dalla popolazione generale saranno identificati da un codice univoco. Il codice del numero e delle lettere maiuscole verrà inserito nel sondaggio e nelle etichette del campione come M0001 (M: città, numero 0001: numero persona 0001). I dati verranno caricati e salvati in un database sicuro. Personale addestrato sarà incaricato della gestione del data base. Gli investigatori supervisioneranno l'inserimento dei dati. Un investigatore, almeno una volta ogni 6 mesi, selezionerà casualmente il 2% del sondaggio e lo confronterà con le informazioni caricate nel database. Inoltre, gli investigatori analizzeranno e riporteranno tutti i dati raccolti dai sondaggi anche se sono incompleti regolando i parametri di analisi di quelli incompleti.

I ricercatori utilizzeranno strumenti statistici descrittivi per descrivere i gruppi (media, deviazione standard ed errore standard o mediana e intervallo interquartile). Per i confronti di gruppo, verranno utilizzati il ​​test T spaiati, il test di Mann Whitney o il test di Fisher. Verranno eseguiti ANOVA, Kruskal Wallis e test Chi Square per confrontare gruppi non abbinati; per quantificare l'associazione tra due variabili verrà utilizzato il test di correlazione di Pearson e Spearman. Verranno prese in considerazione regressioni semplici o multiple per prevedere il valore dalle variabili. Il valore P <0,05 sarà considerato significativo. È stato calcolato un campione della popolazione generale considerando la popolazione adulta tra i 21 ei 70 anni in Ecuador.