Mécanismes de la néphropathie diabétique en Équateur

1. Détermination des facteurs sociaux, environnementaux et biologiques impliqués dans la néphropathie diabétique en Équateur Les enquêteurs étudieront des sujets de la population générale. Les enquêteurs contacteront les chefs communautaires et religieux afin d'inviter des sujets adultes de la population générale à participer à cette étude et 10 000 personnes seront inscrites.

   Après avoir enseigné les concepts de base sur la prévention de la néphropathie diabétique dans toutes les matières, les enquêteurs recueilleront des données démographiques, les conditions de logement et la localisation (rurale, urbaine ou autour des villes), le nombre de personnes qui partagent un logement, le niveau d'éducation, l'emploi et la situation économique, les conditions personnelles l'assurance maladie, l'historique des visites médicales, les habitudes toxiques (alcool, abus de cigarettes de substances addictives) et les habitudes d'exercices physiques. Les enquêteurs recueilleront des antécédents personnels et familiaux de diabète sucré, de néphropathie diabétique, d'hypertension, de maladies rénales, de diabète gestationnel, de traitements actuels et d'autres maladies chroniques. Les enquêteurs mesureront le poids corporel (Kg), la taille (m) et les enquêteurs calculeront l'indice de masse corporelle. Les enquêteurs mesureront également la tension artérielle, la glycémie, l'hémoglobine glycosylée, la microalbuminurie et la protéinurie. Le personnel formé remplira le questionnaire de la personne. Les enquêteurs superviseront et recueilleront des données auprès de 2 % de l'échantillon.

2. Rôle des protéines de la matrice extracellulaire et de la signalisation des facteurs de croissance dans la néphropathie diabétique

   1. Études systémiques et urinaires : les protéines impliquées dans la pathogenèse de la néphropathie diabétique comme le facteur endothélial vasculaire A (VEGF) et la protéine de la matrice extracellulaire comme la concentration de ténascine C (ténascine) seront mesurées par des kits disponibles dans le commerce dans le plasma et l'urine (respectivement). Des échantillons seront obtenus à partir de diabétiques avec (n : 20) et sans néphropathie diabétique (n : 20) et de sujets non diabétiques (témoins) de la population générale (n : 2000). Les déterminations des facteurs sociaux, environnementaux et biologiques seront complétées comme dans l'objectif 1.
   2. Études sur les tissus rénaux : les chercheurs détermineront le rôle de la protéine impliquée dans la néphropathie diabétique, la signalisation du VEGF et la ténascine dans :

I) Le tissu rénal enrobé de paraffine obtenu à partir des bibliothèques d'échantillons des laboratoires de pathologie sera étudié. Des lames de non diabétiques (n : 10) et de diabétiques avec néphropathie diabétique (n : 20) et sans néphropathie diabétique (n : 10) seront collectées. Le rôle des protéines impliquées dans la néphropathie diabétique comme la signalisation du VEGF et la ténascine sera étudié par immunohistochimie et test de liaison de proximité.

II) Des lames de rein incluses dans la paraffine de diabétiques atteints de néphropathie diabétique (n : 12), de témoins non diabétiques (n : 6) avec une glomérulopathie primaire comme maladie à changement minimal et de témoins diabétiques sans néphropathie diabétique (n : 6) seront étudiées. Les enquêteurs recruteront des patients dont la biopsie rénale est indiquée et doit être effectuée par leurs médecins. Une fois le diagnostic de pathologie terminé, une partie du tissu restant inclus dans la paraffine sera utilisée pour cette étude. Le rôle des protéines impliquées dans la néphropathie diabétique, la signalisation du VEGF et la ténascine sera étudié par immunohistochimie et test de liaison de proximité. L'urine et le plasma seront prélevés avant la biopsie rénale afin de mesurer la concentration en protéines de biomarqueurs potentiellement utiles de la néphropathie diabétique ; Les taux de VEGF et de ténascine seront quantifiés. Les patients seront informés et un consentement signé sera requis.

La glycémie sera mesurée par le lecteur de glycémie et la bandelette de test. L'hémoglobine glycosylée A1c et la microalbuminurie (albumine/créatinine dans l'urine ponctuelle) seront quantifiées à l'aide de la machine portable (Siemens).

Dans des conditions de jeûne, les investigateurs prendront en compte des valeurs de glycémie normales < 99 mg %, un pré-diabète entre 100 et 125 mg % et un diabète ≥ 126 mg %. Dans des conditions autres que le jeûne, des valeurs de glycémie > 200 mg % seront considérées comme du diabète. Les enquêteurs considéreront les valeurs normales d'hémoglobine glycosylée A1c <5,6 %, le pré-diabète entre 5,7 et 6,4 % et le diabète ≥6,5 %.

Les enquêteurs considéreront les valeurs d'albuminurie normales du rapport albumine/créatinine < 29 mg/g, les valeurs de microalbuminurie entre 30 et 299 mg/g et les valeurs de macro-albuminurie ≥ 300 mg/g. La protéinurie sera également évaluée par des bandelettes urinaires réactives.

En cas de résultats incohérents ou de valeurs hors plage, l'analyse sera répétée dans le même échantillon ou réanalysée par un équipement et des techniques de laboratoire standard.

Les chercheurs considéreront la néphropathie diabétique comme une protéinurie persistante associée à la rétinopathie diabétique et à une diminution du taux de filtration glomérulaire endogène (chez les sujets sans diagnostic d'autres maladies des reins ou des voies urinaires). Chez les diabétiques de type 1, la néphropathie diabétique sera diagnostiquée si les antécédents de diabète remontent à plus de 10 ans avant l'apparition de la protéinurie ; chez le diabétique de type 2, une protéinurie associée à une diminution du débit de filtration glomérulaire au moment du diagnostic, les investigateurs qualifieront de néphropathie diabétique.

Dans tous les échantillons de rein inclus dans la paraffine, nous mesurerons l'expression et la localisation des protéines. Les enquêteurs utiliseront des kits, des anticorps primaires et secondaires disponibles dans le commerce pour effectuer des tests d'immunohistochimie et de liaison de proximité. Les enquêteurs effectueront ces expériences en coopération avec le pathologiste.

Tous les sujets recrutés dans la population générale seront identifiés par un code unique. Le numéro et le code en lettres majuscules seront placés dans l'enquête et dans les étiquettes d'échantillon sous la forme M0001 (M : ville, numéro 0001 : numéro de personne 0001). Les données seront téléchargées et enregistrées dans une base de données sécurisée. Un personnel formé sera chargé de gérer la base de données. Les enquêteurs superviseront la saisie des données. Au moins une fois tous les 6 mois, un enquêteur sélectionnera au hasard une enquête de 2 % et la comparera aux informations téléchargées dans la base de données. En outre, les enquêteurs analyseront et rapporteront toutes les données collectées à partir des enquêtes, même si elles sont incomplètes, en ajustant les paramètres d'analyse de celles qui sont incomplètes.

Les enquêteurs utiliseront des outils statistiques descriptifs pour décrire les groupes (moyenne, écart-type et erreur-type ou médiane et intervalle interquartile). Pour les comparaisons de groupe, le test T non apparié, le test de Mann Whitney ou de Fisher seront utilisés. Les tests ANOVA, Kruskal Wallis et Chi Square seront effectués pour comparer des groupes non appariés ; pour quantifier l'association entre deux variables, le test de corrélation de Pearson et Spearman sera utilisé. Des régressions simples ou multiples seront envisagées pour prédire la valeur des variables. La valeur P <0,05 sera considérée comme significative. Un échantillon de la population générale a été calculé en tenant compte de la population adulte entre 21 et 70 ans en Équateur.