Mechanismen van diabetische nefropathie in Ecuador

1. Bepalingen van sociale, omgevings- en biologische factoren die betrokken zijn bij diabetische nefropathie in Ecuador Onderzoekers zullen proefpersonen uit de algemene bevolking bestuderen. Onderzoekers zullen contact opnemen met gemeenschaps- en religieuze leiders om volwassen proefpersonen uit de algemene bevolking uit te nodigen om deel te nemen aan deze studie en 10.000 personen zullen worden ingeschreven.

   Na het onderwijzen van basisconcepten over preventie van diabetische nefropathie in alle vakken, zullen onderzoekers demografische gegevens verzamelen, huisomstandigheden en lokalisatie (landelijk, stedelijk of rond de steden), aantal mensen dat een huis deelt, opleidingsniveau, werkgelegenheid en economische toestand, persoonlijke ziektekostenverzekering, medische controlegeschiedenis, giftige gewoonten (alcohol, misbruik van sigaretten of verslavende stoffen) en gewoonten op het gebied van lichaamsbeweging. Onderzoekers zullen persoonlijke en familiale antecedenten verzamelen van diabetes mellitus, diabetische nefropathie, hypertensie, nierziekten, zwangerschapsdiabetes, huidige behandelingen en andere chronische ziekten. Onderzoekers zullen het lichaamsgewicht (Kg), lengte (m) meten en onderzoekers zullen de body mass index berekenen. Onderzoekers zullen ook bloeddruk, bloedglucose, geglycosyleerde hemoglobine, microalbuminurie en proteïnurie meten. Getraind personeel vult de enquête van de persoon in. Onderzoekers zullen toezicht houden op en gegevens verzamelen van 2% van de steekproef.

2. De rol van extracellulaire matrixeiwitten en groeifactoren die signaleren bij diabetische nefropathie

   1. Systemische en urinestudies: eiwitten die betrokken zijn bij de pathogenese van diabetische nefropathie als vasculaire endotheliale factor A (VEGF) en extracellulaire matrixeiwitten als tenascine C (tenascine) zullen worden gemeten met in de handel verkrijgbare kits in plasma en urine (respectievelijk). Er zullen monsters worden genomen van diabetici met (n: 20) en zonder diabetische nefropathie (n: 20) en van niet-diabetici (controles) uit de algemene bevolking (n: 2000). Bepalingen van sociale, omgevings- en biologische factoren worden voltooid zoals in doel 1.
   2. Nierweefselstudies: onderzoekers zullen de rol bepalen van eiwitten die betrokken zijn bij diabetische nefropathie, VEGF-signalering en tenascine bij:

I) In paraffine ingebed nierweefsel verkregen uit de monsterbibliotheken van pathologielaboratoria zal worden bestudeerd. Objectglaasjes van niet-diabetici (n: 10) en diabetici met diabetische nefropathie (n: 20) en zonder diabetische nefropathie (n: 10) worden verzameld. De rol van eiwitten betrokken bij diabetische nefropathie als VEGF-signalering en tenascine zal bestudeerd worden door middel van immunohistochemie en proximity link assay.

II) In paraffine ingebedde nierglaasjes van diabetici met diabetische nefropathie (n: 12), niet-diabetische controle (n: 6) met primaire glomerulopathie als minimale veranderingsziekte, en diabetische controles zonder diabetische nefropathie (n: 6) zullen worden bestudeerd. Onderzoekers zullen patiënten rekruteren met een nierbiopsie die door hun artsen is aangegeven en volgens planning zal worden uitgevoerd. Nadat de pathologiediagnose is voltooid, zal een deel van het overgebleven in paraffine ingebedde weefsel voor dit onderzoek worden gebruikt. De rol van eiwitten die betrokken zijn bij diabetische nefropathie, VEGF-signalering en tenascine zal bestudeerd worden door middel van immunohistochemie en proximity link assay. Voorafgaand aan de nierbiopsie zullen urine en plasma worden verzameld om de eiwitconcentratie van mogelijk bruikbare biomarkers van diabetische nefropathie te meten; De niveaus van VEGF en tenascine zullen worden gekwantificeerd. Patiënten worden geïnformeerd en ondertekende toestemming is vereist.

De bloedglucose wordt gemeten met de bloedglucosemeter en teststrip. Geglycosyleerd hemoglobine A1c en microalbuminurie (albumine/creatinine in spot-urine) zullen worden gekwantificeerd met behulp van de draagbare machine (Siemens).

In nuchtere omstandigheden zullen onderzoekers rekening houden met normale bloedglucosewaarden <99 mg%, pre-diabetes tussen 100 en 125 mg% en diabetes ≥126 mg%. In niet-nuchtere omstandigheden worden waarden van bloedglucose >200mg% beschouwd als diabetes. Onderzoekers zullen normale geglycosyleerde A1c-hemoglobinewaarden <5,6%, pre-diabetes tussen 5,7 en 6,4% en diabetes ≥6,5% beschouwen.

Onderzoekers zullen normale albuminurie-waarden van een albumine/creatinine-verhouding van <29 mg/g, microalbuminurie-waarden tussen 30 en 299 mg/g en macro-albuminurie-waarden van ≥ 300 mg/g beschouwen. Proteïnurie zal ook worden geëvalueerd door middel van reactieve urinestrips.

In het geval van inconsistente resultaten of waarden die buiten het bereik vallen, wordt de analyse herhaald in hetzelfde monster of opnieuw geanalyseerd met standaard laboratoriumapparatuur en -technieken.

Onderzoekers zullen diabetische nefropathie beschouwen als aanhoudende proteïnurie geassocieerd met diabetische retinopathie en verminderde endogene glomerulaire filtratiesnelheid (bij proefpersonen zonder een diagnose van andere nier- of urinewegaandoeningen). Bij type 1-diabetici wordt diabetische nefropathie gediagnosticeerd als de voorgeschiedenis van diabetes langer is dan 10 jaar voorafgaand aan het begin van proteïnurie; bij diabetes type 2, proteïnurie geassocieerd met een verminderde glomerulaire filtratiesnelheid op het moment van diagnose, zullen onderzoekers diabetische nefropathie beschouwen.

In alle in paraffine ingebedde niermonsters zullen we de eiwitexpressie en lokalisatie meten. Onderzoekers zullen kits, primaire en secundaire antilichamen gebruiken die in de handel verkrijgbaar zijn voor het uitvoeren van immunohistochemie en proximity link-assay. Onderzoekers zullen die experimenten uitvoeren in samenwerking met patholoog.

Alle proefpersonen die uit de algemene bevolking worden gerekruteerd, worden geïdentificeerd met een unieke code. Cijfer- en hoofdlettercode worden in de enquête en in de voorbeeldlabels geplaatst als M0001 (M: plaats, nummer 0001: persoonsnummer 0001). Gegevens worden geüpload en opgeslagen in een beveiligde database. Getraind personeel zal verantwoordelijk zijn voor het beheer van de database. Onderzoekers zullen toezicht houden op de invoer van gegevens. Een onderzoeker zal ten minste eenmaal per 6 maanden willekeurig 2% van de enquête selecteren en vergelijken met de informatie die in de database is geüpload. Bovendien zullen onderzoekers alle verzamelde gegevens van de enquêtes analyseren en rapporteren, zelfs als ze onvolledig zijn, door de analyseparameters van de onvolledige enquêtes aan te passen.

Onderzoekers zullen beschrijvende statistische hulpmiddelen gebruiken om groepen te beschrijven (gemiddelde, standaarddeviatie en standaardfout of mediaan en interkwartielbereik). Voor groepsvergelijkingen wordt de ongepaarde T-toets, de Mann Whitney- of de Fisher-toets gebruikt. ANOVA, Kruskal Wallis en Chi Square-test zullen worden uitgevoerd om ongeëvenaarde groepen te vergelijken; om de associatie tussen twee variabelen te kwantificeren, wordt de correlatietest van Pearson en Spearman gebruikt. Eenvoudige of meervoudige regressies worden overwogen om de waarde van variabelen te voorspellen. P-waarde <0,05 wordt als significant beschouwd. Een steekproef uit de algemene bevolking werd berekend rekening houdend met de volwassen bevolking tussen 21-70 jaar oud in Ecuador.