Mecanismos da Nefropatia Diabética no Equador

1. Determinações de fatores sociais, ambientais e biológicos implicados na nefropatia diabética no Equador Os pesquisadores estudarão indivíduos da população em geral. Os investigadores entrarão em contato com líderes comunitários e religiosos para convidar indivíduos adultos da população em geral para participar deste estudo e 10.000 pessoas serão inscritas.

   Depois de ensinar conceitos básicos sobre prevenção da nefropatia diabética em todas as disciplinas, os pesquisadores coletarão dados demográficos, condições e localização da casa (rural, urbana ou nas proximidades das cidades), número de pessoas que compartilham uma casa, nível de escolaridade, emprego e condição econômica, condições pessoais plano de saúde, histórico de exames médicos, hábitos tóxicos (álcool, uso de cigarros e substâncias viciantes) e hábitos de exercícios físicos. Os investigadores irão coletar antecedentes pessoais e familiares de diabetes mellitus, nefropatia diabética, hipertensão, doenças renais, diabetes gestacional, tratamentos atuais e outras doenças crônicas. Os investigadores medirão o peso corporal (Kg), a altura (m) e os investigadores calcularão o índice de massa corporal. Os investigadores também irão medir a pressão arterial, glicemia, hemoglobina glicosilada, microalbuminúria e proteinúria. Pessoal treinado preencherá a pesquisa da pessoa. Os investigadores irão supervisionar e coletar dados de 2% da amostra.

2. Papel das proteínas da matriz extracelular e sinalização dos fatores de crescimento na nefropatia diabética

   1. Estudos sistêmicos e urinários: proteínas envolvidas na patogênese da nefropatia diabética como fator endotelial vascular A (VEGF) e proteína da matriz extracelular como tenascina C (tenascina) serão mensuradas por kits comercialmente disponíveis no plasma e na urina (respectivamente). Amostras serão obtidas de diabéticos com (n: 20) e sem nefropatia diabética (n: 20) e de indivíduos não diabéticos (controles) da população em geral (n: 2000). As determinações do fator social, ambiental e biológico serão concluídas conforme o objetivo 1.
   2. Estudos de tecido renal: os investigadores determinarão o papel da proteína envolvida na nefropatia diabética, sinalização do VEGF e tenascina em:

I) Será estudado tecido renal embebido em parafina obtido de bibliotecas de amostras de laboratórios de patologia. Serão coletadas lâminas de não diabéticos (n: 10) e diabéticos com nefropatia diabética (n: 20) e sem nefropatia diabética (n: 10). O papel de proteínas envolvidas na nefropatia diabética como sinalização do VEGF e tenascina será estudado por imuno-histoquímica e ensaio de ligação de proximidade.

II) Serão estudadas lâminas renais embebidas em parafina de diabéticos com nefropatia diabética (n: 12), controles não diabéticos (n: 6) com glomerulopatia primária como doença de lesões mínimas e controles diabéticos sem nefropatia diabética (n: 6). Os investigadores irão recrutar pacientes com biópsia renal indicada e programada para ser realizada por seus médicos. Após a conclusão do diagnóstico patológico, parte do tecido remanescente embebido em parafina será utilizado para este estudo. O papel das proteínas envolvidas na nefropatia diabética, sinalização do VEGF e tenascina será estudado por imuno-histoquímica e ensaio de ligação de proximidade. Urina e plasma serão coletados antes da biópsia renal para medir a concentração de proteínas de biomarcadores potencialmente úteis de nefropatia diabética; Os níveis de VEGF e tenascina serão quantificados. Os pacientes serão informados e o consentimento assinado será necessário.

A glicose no sangue será medida pelo medidor de glicose no sangue e pela tira de teste. A hemoglobina glicosilada A1c e a microalbuminúria (albumina/creatinina na urina spot) serão quantificadas em máquina portátil (Siemens).

Em condições de jejum, os investigadores irão considerar valores normais de glicose no sangue <99 mg%, pré-diabetes entre 100 e 125 mg% e diabetes ≥126 mg%. Em condições de não jejum, valores de glicose no sangue > 200mg% serão considerados como diabetes. Os investigadores considerarão valores normais de hemoglobina glicosilada A1c <5,6%, pré-diabetes entre 5,7 e 6,4% e diabetes ≥6,5%.

Os investigadores considerarão valores de albuminúria normais da relação albumina/creatinina <29mg/g, valores de microalbuminúria entre 30 e 299 mg/g e valores de macroalbuminúria ≥300mg/g. A proteinúria também será avaliada por tiras de urina reativa.

No caso de resultados inconsistentes ou valores fora do intervalo, a análise será repetida na mesma amostra ou reanalisada por equipamentos e técnicas laboratoriais padrão.

Os investigadores irão considerar a nefropatia diabética como proteinúria persistente associada à retinopatia diabética e diminuição da taxa de filtração glomerular endógena (em indivíduos sem diagnóstico de outras doenças renais ou do trato urinário). Em diabéticos tipo 1, a nefropatia diabética será diagnosticada se a história de diabetes for superior a 10 anos antes do início da proteinúria; em diabéticos tipo 2, proteinúria associada a uma diminuição da taxa de filtração glomerular no momento do diagnóstico, os investigadores irão considerar nefropatia diabética.

Em todas as amostras de rim embebidas em parafina mediremos a expressão e localização da proteína. Os investigadores usarão kits, anticorpos primários e secundários disponíveis comercialmente para realizar imuno-histoquímica e ensaio de ligação de proximidade. Os investigadores realizarão esses experimentos em cooperação com o patologista.

Todos os indivíduos recrutados da população geral serão identificados por um código único. Número e código de letras maiúsculas serão colocados na pesquisa e nos rótulos de amostra como M0001 (M: cidade, número 0001: pessoa número 0001). Os dados serão carregados e salvos em um banco de dados seguro. Pessoal treinado será responsável pelo manuseio do banco de dados. Os investigadores irão supervisionar a entrada de dados. Um investigador, pelo menos uma vez a cada 6 meses, selecionará aleatoriamente uma pesquisa de 2% e a comparará com as informações carregadas no banco de dados. Além disso, os investigadores analisarão e relatarão todos os dados coletados das pesquisas, mesmo que estejam incompletos, ajustando os parâmetros de análise dos incompletos.

Os investigadores usarão ferramentas estatísticas descritivas para descrever os grupos (média, desvio padrão e erro padrão ou mediana e intervalo interquartílico). Para comparações de grupos, será utilizado o teste T não pareado, Mann Whitney ou teste de Fisher. ANOVA, Kruskal Wallis e teste Qui-quadrado serão realizados para comparar grupos não pareados; para quantificar a associação entre duas variáveis ​​será utilizado o teste de correlação de Pearson e Spearman. Regressões simples ou múltiplas serão consideradas para prever o valor das variáveis. Valor de P <0,05 será considerado significativo. Uma amostra da população geral foi calculada considerando a população adulta entre 21-70 anos no Equador.