Mekanismer for diabetisk nefropati i Ecuador

1. Bestemmelser af sociale, miljømæssige og biologiske faktorer involveret i diabetisk nefropati i Ecuador Efterforskere vil studere emner fra den generelle befolkning. Efterforskere vil kontakte samfundsledere og religiøse ledere for at invitere voksne personer fra den almindelige befolkning til at deltage i denne undersøgelse, og 10.000 personer vil blive tilmeldt.

   Efter at have undervist i grundlæggende begreber om forebyggelse af diabetisk nefropati i alle emner, vil efterforskerne indsamle demografiske data, husforhold og lokalisering (landdistrikter, byer eller omkring byer), antal mennesker, der deler et hjem, uddannelsesniveau, beskæftigelse og økonomisk tilstand, personlig sygesikring, sygehistorie, giftige vaner (alkohol, cigaretmisbrug af vanedannende stoffer) og fysiske træningsvaner. Efterforskere vil indsamle personlige og familiemæssige forudsætninger for diabetes mellitus, diabetisk nefropati, hypertension, nyresygdomme, svangerskabsdiabetes, nuværende behandlinger og andre kroniske sygdomme. Efterforskere vil måle kropsvægt (Kg), højde (m), og efterforskere vil beregne kropsmasseindeks. Efterforskere vil også måle blodtryk, blodsukker, glykosyleret hæmoglobin, mikroalbuminuri og proteinuri. Uddannet personale vil udfylde personens undersøgelse. Efterforskere vil overvåge og indsamle data fra 2 % af stikprøven.

2. Rolle af ekstracellulære matrixproteiner og vækstfaktorer, der signalerer i diabetisk nefropati

   1. Systemiske undersøgelser og urinstudier: Proteiner involveret i diabetisk nefropatipatogenese som vaskulær endotelfaktor A (VEGF) og ekstracellulært matrixprotein som tenascin C (tenascin) koncentration vil blive målt med et kommercielt tilgængeligt sæt i henholdsvis plasma og urin. Prøver vil blive indhentet fra diabetikere med (n: 20) og uden diabetisk nefropati (n: 20) og fra ikke-diabetikere (kontroller) fra den generelle befolkning (n: 2000). Bestemmelser af sociale, miljømæssige og biologiske faktorer vil blive afsluttet som i mål 1.
   2. Nyrevævsundersøgelser: Forskere vil bestemme, hvilken rolle protein involveret i diabetisk nefropati, VEGF-signalering og tenascin i:

I) Paraffinindlejret nyrevæv opnået fra prøvebibliotekerne i patologilaboratorier vil blive undersøgt. Objektglas fra ikke-diabetikere (n: 10) og diabetikere med diabetisk nefropati (n: 20) og uden diabetisk nefropati (n: 10) vil blive indsamlet. Rollen af ​​proteiner involveret i diabetisk nefropati som VEGF-signalering og tenascin vil blive undersøgt ved immunhistokemi og proximity link assay.

II) Paraffinindlejrede nyreglas fra diabetikere med diabetisk nefropati (n: 12), ikke-diabetisk kontrol (n: 6) med primær glomerulopati som minimal forandringssygdom og diabetiske kontroller uden diabetisk nefropati (n: 6), vil blive undersøgt. Efterforskere vil rekruttere patienter med nyrebiopsi angivet og planlagt til at blive udført af deres læger. Efter afslutning af patologisk diagnose vil noget af det resterende paraffinindlejrede væv blive brugt til denne undersøgelse. Rollen af ​​proteiner involveret i diabetisk nefropati, VEGF-signalering og tenascin vil blive undersøgt ved immunhistokemi og proximity link assay. Urin og plasma vil blive opsamlet før nyrebiopsien for at måle proteinkoncentrationen af ​​potentielt nyttige biomarkører for diabetisk nefropati; VEGF og tenascin niveauer vil blive kvantificeret. Patienterne vil blive informeret og underskrevet samtykke vil være påkrævet.

Blodsukkeret vil blive målt af blodsukkermåleren og teststrimlen. Glykosyleret hæmoglobin A1c og mikroalbuminuri (albumin/kreatinin i pleturin) vil blive kvantificeret ved hjælp af den bærbare maskine (Siemens).

Under fastende forhold vil forskere overveje normale blodsukkerværdier <99 mg%, præ-diabetes mellem 100 og 125 mg% og diabetes ≥126 mg%. Under ikke-fastende forhold vil værdier af blodsukker >200 mg% blive betragtet som diabetes. Efterforskere vil vurdere normale glykosylerede A1c-hæmoglobinværdier <5,6 %, prædiabetes mellem 5,7 og 6,4 % og diabetes ≥6,5 %.

Forskere vil vurdere normale albuminuri-værdier af albumin/kreatinin-forhold <29mg/g, mikroalbuminuri-værdier mellem 30 og 299 mg/g og makro-albuminuri-værdier ≥300mg/g. Proteinuri vil også blive evalueret ved hjælp af reaktive urinstrimler.

I tilfælde af inkonsistente resultater eller værdier uden for området vil analysen blive gentaget i den samme prøve eller genanalyseret med standard laboratorieudstyr og -teknikker.

Forskere vil betragte diabetisk nefropati som vedvarende proteinuri forbundet med diabetisk retinopati og nedsat endogen glomerulær filtrationshastighed (hos forsøgspersoner uden en diagnose af andre nyre- eller urinvejssygdomme). Hos type 1-diabetikere vil diabetisk nefropati blive diagnosticeret, hvis diabeteshistorien er længere end 10 år før starten af ​​proteinuri; hos diabetes type 2, proteinuri forbundet med en nedsat glomerulær filtrationshastighed på diagnosetidspunktet, vil efterforskere vurdere diabetisk nefropati.

I alle paraffinindlejrede nyreprøver vil vi måle proteinekspression og lokalisering. Efterforskere vil bruge kits, primære og sekundære antistoffer, der er kommercielt tilgængelige til at udføre immunhistokemi og proximity link assay. Efterforskerne vil udføre disse eksperimenter i samarbejde med patologen.

Alle forsøgspersoner rekrutteret fra den almindelige befolkning vil blive identificeret med en unik kode. Nummer og store bogstaver vil blive placeret i undersøgelsen og i prøveetiketterne som M0001 (M: by, nummer 0001: personnummer 0001). Data vil blive uploadet og gemt i en sikker database. Uddannet personale vil stå for håndteringen af ​​databasen. Efterforskere vil overvåge dataindtastningen. En investigator vil mindst én gang hver 6. måned tilfældigt udvælge 2 % undersøgelse og matche den med de oplysninger, der er uploadet i databasen. Endvidere vil efterforskerne analysere og rapportere alle indsamlede data fra undersøgelserne, selvom de er ufuldstændige, ved at justere analyseparametrene for de ufuldstændige.

Efterforskere vil bruge beskrivende statistiske værktøjer til at beskrive grupper (middelværdi, standardafvigelse og standardfejl eller median- og interkvartilområde). Til gruppesammenligninger vil uparret T-test, Mann Whitney eller Fishers test blive brugt. ANOVA, Kruskal Wallis og Chi Square test vil blive udført for at sammenligne uovertrufne grupper; til at kvantificere sammenhæng mellem to variabler vil Pearson og Spearman korrelationstest blive brugt. Simple eller multiple regressioner vil blive overvejet for at forudsige værdi fra variable. P-værdi <0,05 vil blive anset for signifikant. En stikprøve fra den generelle befolkning blev beregnet under hensyntagen til den voksne befolkning mellem 21-70 år i Ecuador.