Mecanismos de la Nefropatía Diabética en Ecuador

1. Determinaciones de factores sociales, ambientales y biológicos implicados en la nefropatía diabética en el Ecuador Los investigadores estudiarán sujetos de la población general. Los investigadores contactarán a los líderes comunitarios y religiosos para invitar a sujetos adultos de la población general a participar en este estudio y se inscribirán 10000 personas.

   Después de enseñar los conceptos básicos sobre la prevención de la nefropatía diabética en todas las materias, los investigadores recopilarán datos demográficos, condiciones de la casa y ubicación (rural, urbana o alrededor de las ciudades), número de personas que comparten una casa, nivel de educación, condición laboral y económica, personal seguro de salud, historial de chequeos médicos, hábitos tóxicos (alcohol, cigarrillo, abuso de sustancias adictivas) y hábitos de ejercicio físico. Los investigadores recogerán antecedentes personales y familiares de diabetes mellitus, nefropatía diabética, hipertensión arterial, enfermedades renales, diabetes gestacional, tratamientos actuales y otras enfermedades crónicas. Los investigadores medirán el peso corporal (Kg), la altura (m) y calcularán el índice de masa corporal. Los investigadores también medirán la presión arterial, la glucosa en sangre, la hemoglobina glicosilada, la microalbuminuria y la proteinuria. Personal capacitado llenará la encuesta de la persona. Los investigadores supervisarán y recopilarán datos del 2% de la muestra.

2. Papel de las proteínas de la matriz extracelular y la señalización de factores de crecimiento en la nefropatía diabética

   1. Estudios sistémicos y de orina: las proteínas implicadas en la patogenia de la nefropatía diabética como el factor A endotelial vascular (VEGF) y la proteína de la matriz extracelular como la tenascina C (tenascina) se medirán mediante kits disponibles comercialmente en plasma y orina (respectivamente). Las muestras se obtendrán de diabéticos con (n: 20) y sin nefropatía diabética (n: 20) y de sujetos no diabéticos (controles) de la población general (n: 2000). Las determinaciones del factor social, ambiental y biológico se completarán como en el objetivo 1.
   2. Estudios de tejido renal: los investigadores determinarán el papel de la proteína involucrada en la nefropatía diabética, la señalización de VEGF y la tenascina en:

I) Se estudiará el tejido renal incluido en parafina obtenido de las bibliotecas de muestras de los laboratorios de patología. Se recogerán láminas de no diabéticos (n: 10) y diabéticos con nefropatía diabética (n: 20) y sin nefropatía diabética (n: 10). El papel de las proteínas implicadas en la nefropatía diabética como la señalización de VEGF y la tenascina se estudiará mediante inmunohistoquímica y ensayo de enlace de proximidad.

II) Se estudiarán láminas renales embebidas en parafina de diabéticos con nefropatía diabética (n: 12), controles no diabéticos (n: 6) con glomerulopatía primaria como enfermedad de cambios mínimos y controles diabéticos sin nefropatía diabética (n: 6). Los investigadores reclutarán pacientes con biopsia renal indicada y programada para ser realizada por sus médicos. Después de completar el diagnóstico patológico, parte del tejido incrustado en parafina remanente se utilizará para este estudio. El papel de las proteínas implicadas en la nefropatía diabética, la señalización de VEGF y la tenascina se estudiará mediante inmunohistoquímica y ensayo de enlace de proximidad. La orina y el plasma se recolectarán antes de la biopsia renal para medir la concentración de proteínas de biomarcadores potencialmente útiles de la nefropatía diabética; Se cuantificarán los niveles de VEGF y tenascina. Se informará a los pacientes y se requerirá el consentimiento firmado.

La glucosa en sangre se medirá con el medidor de glucosa en sangre y la tira reactiva. La hemoglobina glicosilada A1c y la microalbuminuria (albúmina/creatinina en orina puntual) se cuantificarán mediante la máquina portátil (Siemens).

En condiciones de ayuno, los investigadores considerarán valores normales de glucosa en sangre <99 mg%, prediabetes entre 100 y 125 mg% y diabetes ≥126 mg%. En condiciones de no ayuno valores de glucosa en sangre >200mg% serán considerados como diabetes. Los investigadores considerarán valores normales de hemoglobina A1c glicosilada <5,6 %, prediabetes entre 5,7 y 6,4 % y diabetes ≥6,5 %.

Los investigadores considerarán valores normales de albuminuria del cociente albúmina/creatinina < 29 mg/g, valores de microalbuminuria entre 30 y 299 mg/g y valores de macroalbuminuria ≥ 300 mg/g. También se evaluará la proteinuria mediante tiras reactivas de orina.

En el caso de resultados inconsistentes o valores fuera de rango, el análisis se repetirá en la misma muestra o se volverá a analizar con equipos y técnicas de laboratorio estándar.

Los investigadores considerarán nefropatía diabética como proteinuria persistente asociada a retinopatía diabética y disminución de la tasa de filtración glomerular endógena (en sujetos sin diagnóstico de otras enfermedades renales o del tracto urinario). En los diabéticos tipo 1, se diagnosticará nefropatía diabética si la historia de diabetes es mayor a 10 años antes del inicio de la proteinuria; en diabéticos tipo 2, proteinuria asociada a una tasa de filtración glomerular disminuida en el momento del diagnóstico, los investigadores considerarán nefropatía diabética.

En todas las muestras de riñón embebidas en parafina mediremos la expresión y localización de la proteína. Los investigadores utilizarán kits, anticuerpos primarios y secundarios comercialmente disponibles para realizar inmunohistoquímica y análisis de enlace de proximidad. Los investigadores realizarán esos experimentos en cooperación con el patólogo.

Todos los sujetos reclutados de la población general se identificarán mediante un código único. El código de números y letras mayúsculas se colocará en la encuesta y en las etiquetas de la muestra como M0001 (M: ciudad, número 0001: número de persona 0001). Los datos se cargarán y guardarán en una base de datos segura. Personal capacitado estará a cargo del manejo de la base de datos. Los investigadores supervisarán la entrada de datos. Un investigador, al menos una vez cada 6 meses, seleccionará al azar el 2 % de la encuesta y la comparará con la información cargada en la base de datos. Además, los investigadores analizarán e informarán todos los datos recopilados de las encuestas, incluso si están incompletos, ajustando los parámetros de análisis de las encuestas incompletas.

Los investigadores utilizarán herramientas de estadísticas descriptivas para describir grupos (media, desviación estándar y error estándar o mediana y rango intercuartílico). Para las comparaciones de grupos, se utilizará la prueba T no pareada, la prueba de Mann Whitney o la prueba de Fisher. Se realizarán pruebas ANOVA, Kruskal Wallis y Chi Square para comparar grupos no emparejados; para cuantificar la asociación entre dos variables se utilizará la prueba de correlación de Pearson y Spearman. Se considerarán regresiones simples o múltiples para predecir el valor de las variables. Se considerará significativo un valor de p <0,05. Se calculó una muestra de la población general considerando la población adulta entre 21-70 años en el Ecuador.