Mechanizmy nefropatii cukrzycowej w Ekwadorze

1. Określenie czynnika społecznego, środowiskowego i biologicznego związanego z nefropatią cukrzycową w Ekwadorze Badacze będą badać osoby z populacji ogólnej. Badacze skontaktują się z przywódcami społeczności i religijnymi w celu zaproszenia dorosłych osób z populacji ogólnej do udziału w tym badaniu i zapisanych zostanie 10 000 osób.

   Po nauczeniu podstawowych pojęć dotyczących profilaktyki nefropatii cukrzycowej we wszystkich przedmiotach, badacze zbiorą dane demograficzne, warunki mieszkaniowe i lokalizację (wieś, miasto lub okolice miast), liczbę osób wspólnie zamieszkujących w domu, poziom wykształcenia, zatrudnienie i sytuację ekonomiczną, osobiste ubezpieczenie zdrowotne, historia badań lekarskich, toksyczne nawyki (alkohol, papierosy, nadużywanie substancji uzależniających) oraz nawyki związane z ćwiczeniami fizycznymi. Badacze zbiorą osobiste i rodzinne dane dotyczące cukrzycy, nefropatii cukrzycowej, nadciśnienia tętniczego, chorób nerek, cukrzycy ciążowej, aktualnych metod leczenia i innych chorób przewlekłych. Badacze zmierzą masę ciała (kg), wzrost (m) i obliczą wskaźnik masy ciała. Badacze zmierzą również ciśnienie krwi, poziom glukozy we krwi, hemoglobinę glikozylowaną, mikroalbuminurię i białkomocz. Przeszkolony personel wypełni ankietę osoby. Śledczy będą nadzorować i zbierać dane z 2% próby.

2. Rola białek macierzy pozakomórkowej i czynników wzrostu w sygnalizacji w nefropatii cukrzycowej

   1. Badania ogólnoustrojowe i moczu: stężenie białek biorących udział w patogenezie nefropatii cukrzycowej, takich jak czynnik śródbłonka naczyń A (VEGF) i białko macierzy pozakomórkowej, takie jak tenascyna C (tenascyna), będzie mierzone za pomocą dostępnych na rynku zestawów odpowiednio w osoczu iw moczu. Próbki będą pobierane od diabetyków z (n: 20) i bez nefropatii cukrzycowej (n: 20) oraz od osób bez cukrzycy (grupa kontrolna) z populacji ogólnej (n: 2000). Określenia czynnika społecznego, środowiskowego i biologicznego zostaną wykonane jak w celu 1.
   2. Badania tkanki nerki: badacze określą rolę białka zaangażowanego w nefropatię cukrzycową, sygnalizację VEGF i tenascynę w:

I) Zbadana zostanie tkanka nerki zatopiona w parafinie, pobrana z bibliotek próbek laboratoriów patologicznych. Zostaną zebrane preparaty od osób bez cukrzycy (n: 10) i diabetyków z nefropatią cukrzycową (n: 20) i bez nefropatii cukrzycowej (n: 10). Rola białek biorących udział w nefropatii cukrzycowej jako sygnalizacji VEGF i tenascyny będzie badana za pomocą testu immunohistochemicznego i wiązania zbliżeniowego.

II) Zbadane zostaną preparaty nerek zatopione w parafinie od diabetyków z nefropatią cukrzycową (n: 12), kontroli bez cukrzycy (n: 6) z pierwotną glomerulopatią jako chorobą o minimalnych zmianach i kontroli cukrzycowych bez nefropatii cukrzycowej (n: 6). Badacze będą rekrutować pacjentów z biopsją nerki wskazaną i zaplanowaną do wykonania przez ich lekarzy. Po zakończeniu diagnostyki patomorfologicznej część pozostałej tkanki zatopionej w parafinie zostanie wykorzystana do tego badania. Rola białek zaangażowanych w nefropatię cukrzycową, sygnalizację VEGF i tenascynę będzie badana za pomocą testu immunohistochemicznego i wiązania zbliżeniowego. Mocz i osocze zostaną pobrane przed wykonaniem biopsji nerki w celu oznaczenia stężenia białek potencjalnie użytecznych biomarkerów nefropatii cukrzycowej; Poziomy VEGF i tenascyny zostaną określone ilościowo. Pacjenci zostaną poinformowani i wymagana będzie podpisana zgoda.

Poziom glukozy we krwi zostanie zmierzony za pomocą glukometru i paska testowego. Hemoglobina glikozylowana A1c i mikroalbuminuria (albumina/kreatynina w moczu punktowym) będą oznaczane ilościowo za pomocą przenośnego urządzenia (Siemens).

Na czczo badacze wezmą pod uwagę prawidłowe wartości glukozy we krwi <99 mg%, stan przedcukrzycowy między 100 a 125 mg% i cukrzycę ≥126 mg%. W warunkach nie na czczo wartości glukozy we krwi >200mg% będą uważane za cukrzycę. Badacze uznają prawidłowe wartości glikozylowanej hemoglobiny A1c <5,6%, stan przedcukrzycowy między 5,7 a 6,4% i cukrzycę ≥6,5%.

Badacze uznają prawidłowe wartości albuminurii przy stosunku albumina/kreatynina <29 mg/g, wartości mikroalbuminurii między 30 a 299 mg/g oraz wartości makroalbuminurii ≥300 mg/g. Białkomocz zostanie również oceniony za pomocą reaktywnych pasków moczu.

W przypadku niespójnych wyników lub wartości spoza zakresu analiza zostanie powtórzona na tej samej próbce lub ponownie przeanalizowana przy użyciu standardowego wyposażenia i technik laboratoryjnych.

Badacze wezmą pod uwagę nefropatię cukrzycową jako uporczywy białkomocz związany z retinopatią cukrzycową i zmniejszonym wskaźnikiem endogennego przesączania kłębuszkowego (u osób bez rozpoznanej innej choroby nerek lub dróg moczowych). U chorych na cukrzycę typu 1 nefropatię cukrzycową rozpoznaje się, jeśli historia cukrzycy jest dłuższa niż 10 lat przed wystąpieniem białkomoczu; w przypadku cukrzycy typu 2 białkomocz związany ze zmniejszoną szybkością przesączania kłębuszkowego w momencie rozpoznania badacze uznają za nefropatię cukrzycową.

We wszystkich próbkach nerek zatopionych w parafinie będziemy mierzyć ekspresję i lokalizację białka. Badacze wykorzystają dostępne w handlu zestawy, pierwszorzędowe i drugorzędowe przeciwciała, aby przeprowadzić testy immunohistochemiczne i bliskościowe. Śledczy przeprowadzą te eksperymenty we współpracy z patologiem.

Wszyscy badani rekrutowani z populacji ogólnej będą identyfikowani za pomocą unikalnego kodu. Kod cyfrowo-literowy zostanie umieszczony w ankiecie i na etykietach próbek jako M0001 (M: miasto, numer 0001: numer osoby 0001). Dane zostaną przesłane i zapisane w bezpiecznej bazie danych. Przeszkolony personel będzie odpowiedzialny za obsługę bazy danych. Śledczy będą nadzorować wprowadzanie danych. Badacz co najmniej raz na 6 miesięcy wybierze losowo 2% ankietę i porówna ją z informacjami przesłanymi do bazy danych. Ponadto badacze będą analizować i raportować wszystkie zebrane dane z ankiet, nawet jeśli są one niekompletne, dostosowując parametry analizy niekompletnych.

Badacze wykorzystają opisowe narzędzia statystyczne do opisania grup (średnia, odchylenie standardowe i błąd standardowy lub mediana i rozstęp międzykwartylowy). Do porównań grup zostanie użyty test T dla niesparowanych par, test Manna Whitneya lub test Fishera. W celu porównania niedopasowanych grup zostaną przeprowadzone testy ANOVA, Kruskala Wallisa i Chi Square; do ilościowego określenia związku między dwiema zmiennymi zastosowany zostanie test korelacji Pearsona i Spearmana. Prosta lub wielokrotna regresja będzie brana pod uwagę przy przewidywaniu wartości ze zmiennych. Wartość P <0,05 zostanie uznana za istotną. Próba z populacji ogólnej została obliczona z uwzględnieniem dorosłej populacji Ekwadoru w wieku od 21 do 70 lat.