Mekanismer for diabetisk nefropati i Ecuador

1. Bestemmelser av sosiale, miljømessige og biologiske faktorer involvert i diabetisk nefropati i Ecuador. Etterforskere vil studere emner fra den generelle befolkningen. Etterforskere vil kontakte samfunns- og religiøse ledere for å invitere voksne personer fra den generelle befolkningen til å delta i denne studien, og 10 000 personer vil bli registrert.

   Etter å ha lært grunnleggende konsepter om forebygging av diabetisk nefropati i alle fag, vil etterforskerne samle inn demografiske data, husforhold og lokalisering (landlig, urbant eller rundt byene), antall personer som deler et hjem, utdanningsnivå, sysselsetting og økonomisk tilstand, personlig helseforsikring, medisinsk sjekkhistorie, giftige vaner (alkohol, sigarettmisbruk av vanedannende stoffer) og fysiske treningsvaner. Etterforskere vil samle personlige og familieforløp til diabetes mellitus, diabetisk nefropati, hypertensjon, nyresykdommer, svangerskapsdiabetes, nåværende behandlinger og andre kroniske sykdommer. Etterforskere vil måle kroppsvekt (Kg), høyde (m) og etterforskere vil beregne kroppsmasseindeks. Etterforskerne vil også måle blodtrykk, blodsukker, glykosylert hemoglobin, mikroalbuminuri og proteinuri. Opplært personell vil fylle ut personens undersøkelse. Etterforskere vil overvåke og samle inn data fra 2 % av utvalget.

2. Rollen til ekstracellulære matriseproteiner og vekstfaktorer som signaliserer i diabetisk nefropati

   1. Systemiske studier og urinstudier: Proteiner involvert i diabetisk nefropatipatogenese som vaskulær endotelfaktor A (VEGF) og ekstracellulært matriseprotein som tenascin C (tenascin) konsentrasjon vil bli målt med et kommersielt tilgjengelig sett i henholdsvis plasma og urin. Det vil bli tatt prøver fra diabetikere med (n: 20) og uten diabetisk nefropati (n: 20) og fra ikke-diabetikere (kontroller) fra den generelle befolkningen (n: 2000). Bestemmelser av sosial, miljømessig og biologisk faktor vil bli fullført som i mål 1.
   2. Nyrevevsstudier: etterforskere vil bestemme rollen til protein involvert i diabetisk nefropati, VEGF-signalering og tenascin i:

I) Parafininnstøpt nyrevev hentet fra prøvebibliotekene til patologilaboratorier vil bli studert. Objektglass fra ikke-diabetikere (n: 10) og diabetikere med diabetisk nefropati (n: 20) og uten diabetisk nefropati (n: 10) vil bli samlet inn. Rollen til proteiner involvert i diabetisk nefropati som VEGF-signalering og tenascin vil bli studert ved immunhistokjemi og proximity link-analyse.

II) Parafininnstøpte nyreglass fra diabetikere med diabetisk nefropati (n: 12), ikke-diabetisk kontroll (n: 6) med primær glomerulopati som minimal endringssykdom, og diabetiske kontroller uten diabetisk nefropati (n: 6), vil bli studert. Etterforskere vil rekruttere pasienter med nyrebiopsi indikert, og planlagt utført, av deres lege. Etter fullført patologidiagnose vil noe av det resterende parafininnstøpte vevet bli brukt til denne studien. Rollen til proteiner involvert i diabetisk nefropati, VEGF-signalering og tenascin vil bli studert ved immunhistokjemi og proximity link assay. Urin og plasma vil bli samlet før nyrebiopsien for å måle proteinkonsentrasjonen av potensielt nyttige biomarkører for diabetisk nefropati; VEGF- og tenascinnivåer vil bli kvantifisert. Pasienter vil bli informert og signert samtykke vil være nødvendig.

Blodsukkeret vil bli målt av blodsukkermåleren og teststrimmelen. Glykosylert hemoglobin A1c og mikroalbuminuri (albumin/kreatinin i flekkurin) vil bli kvantifisert ved hjelp av den bærbare maskinen (Siemens).

Under fastende forhold vil etterforskere vurdere normale blodsukkerverdier <99 mg%, pre-diabetes mellom 100 og 125 mg% og diabetes ≥126 mg%. Ved ikke-fastende tilstander vil verdier av blodsukker >200mg% betraktes som diabetes. Etterforskere vil vurdere normale glykosylerte A1c-hemoglobinverdier <5,6 %, pre-diabetes mellom 5,7 og 6,4 % og diabetes ≥6,5 %.

Undersøkere vil vurdere normale albuminuriverdier av albumin/kreatinin-forhold <29mg/g, mikroalbuminuriverdier mellom 30 og 299 mg/g og makroalbuminuriverdier ≥300mg/g. Proteinuri vil også bli evaluert med reaktive urinstrimler.

Ved inkonsistente resultater eller verdier utenfor området vil analysen bli gjentatt i samme prøve eller analysert på nytt med standard laboratorieutstyr og -teknikker.

Etterforskere vil vurdere diabetisk nefropati som vedvarende proteinuri assosiert med diabetisk retinopati og redusert endogen glomerulær filtrasjonshastighet (hos personer uten diagnose av andre nyre- eller urinveissykdommer). Hos type 1-diabetikere vil diabetisk nefropati bli diagnostisert hvis diabeteshistorien er lengre enn 10 år før utbruddet av proteinuri; hos diabetiker type 2, proteinuri assosiert med redusert glomerulær filtrasjonshastighet ved diagnosetidspunktet, vil etterforskere vurdere diabetisk nefropati.

I alle parafininnstøpte nyreprøver vil vi måle proteinekspresjonen og lokaliseringen. Etterforskere vil bruke sett, primære og sekundære antistoffer som er kommersielt tilgjengelige for å utføre immunhistokjemi og proximity link assay. Etterforskere vil utføre disse eksperimentene i samarbeid med patolog.

Alle forsøkspersoner rekruttert fra den generelle befolkningen vil bli identifisert med en unik kode. Tall og store bokstaver vil bli plassert i undersøkelsen og i prøveetikettene som M0001 (M: by, nummer 0001: personnummer 0001). Data vil bli lastet opp og lagret i en sikker database. Opplært personell vil ha ansvar for å håndtere databasen. Etterforskere vil overvåke dataregistreringen. En etterforsker vil minst en gang hver sjette måned tilfeldig velge 2 % undersøkelse og matche den mot informasjonen som er lastet opp i databasen. Videre vil etterforskere analysere og rapportere alle innsamlede data fra undersøkelsene selv om de er ufullstendige ved å justere analyseparametrene til de ufullstendige.

Etterforskerne vil bruke beskrivende statistiske verktøy for å beskrive grupper (gjennomsnitt, standardavvik og standardfeil eller median- og interkvartilområde). For gruppesammenlikninger vil uparet T-test, Mann Whitney eller Fishers test bli brukt. ANOVA, Kruskal Wallis og Chi Square tester vil bli utført for å sammenligne uovertrufne grupper; for å kvantifisere assosiasjon mellom to variabler vil Pearson og Spearman korrelasjonstest bli brukt. Enkle eller flere regresjoner vil bli vurdert for å forutsi verdi fra variabler. P-verdi <0,05 vil bli ansett som signifikant. Et utvalg fra den generelle befolkningen ble beregnet med tanke på den voksne befolkningen mellom 21-70 år i Ecuador.