Mekanismer för diabetisk nefropati i Ecuador

1. Bestämningar av sociala, miljömässiga och biologiska faktorer som är inblandade i diabetisk nefropati i Ecuador. Utredarna kommer att studera ämnen från den allmänna befolkningen. Utredarna kommer att kontakta samhällsledare och religiösa ledare för att bjuda in vuxna personer från den allmänna befolkningen att delta i denna studie och 10 000 personer kommer att registreras.

   Efter att ha lärt ut grundläggande begrepp om förebyggande av diabetisk nefropati i alla ämnen, kommer utredarna att samla in demografiska data, husförhållanden och lokalisering (på landsbygden, i städerna eller runt städerna), antal personer som delar ett hem, utbildningsnivå, sysselsättning och ekonomiskt tillstånd, personligt sjukförsäkring, medicinsk undersökningshistorik, giftiga vanor (alkohol, cigarettmissbruk av beroendeframkallande ämnen) och fysiska träningsvanor. Utredarna kommer att samla in personliga och familjära föregångare till diabetes mellitus, diabetisk nefropati, högt blodtryck, njursjukdomar, graviditetsdiabetes, nuvarande behandlingar och andra kroniska sjukdomar. Utredarna kommer att mäta kroppsvikt (Kg), längd (m) och utredarna kommer att beräkna body mass index. Utredarna kommer också att mäta blodtryck, blodsocker, glykosylerat hemoglobin, mikroalbuminuri och proteinuri. Utbildad personal kommer att fylla i personens enkät. Utredarna kommer att övervaka och samla in data från 2 % av urvalet.

2. Roll av extracellulära matrisproteiner och tillväxtfaktorer som signalerar vid diabetisk nefropati

   1. Systemiska studier och urinstudier: proteiner involverade i diabetisk nefropatipatogenes som vaskulär endotelfaktor A (VEGF) och extracellulärt matrisprotein som tenascin C (tenascin) koncentration kommer att mätas med ett kommersiellt tillgängligt kit i plasma respektive urin. Prover kommer att erhållas från diabetiker med (n: 20) och utan diabetisk nefropati (n: 20) och från icke-diabetiker (kontroller) från den allmänna befolkningen (n: 2000). Bestämningar av sociala, miljömässiga och biologiska faktorer kommer att slutföras som i mål 1.
   2. Njurvävnadsstudier: utredarna kommer att bestämma rollen för protein involverat i diabetisk nefropati, VEGF-signalering och tenascin i:

I) Paraffininbäddad njurvävnad erhållen från provbiblioteken i patologilaboratorier kommer att studeras. Objektglas från icke-diabetiker (n: 10) och diabetiker med diabetisk nefropati (n: 20) och utan diabetisk nefropati (n: 10) kommer att samlas in. Rollen av proteiner involverade i diabetisk nefropati som VEGF-signalering och tenascin kommer att studeras genom immunhistokemi och närhetslänksanalys.

II) Paraffininbäddade njurglas från diabetiker med diabetisk nefropati (n: 12), icke-diabetisk kontroll (n: 6) med primär glomerulopati som minimal förändringssjukdom och diabetiska kontroller utan diabetisk nefropati (n: 6), kommer att studeras. Utredarna kommer att rekrytera patienter med njurbiopsi indikerad och planerad att utföras av deras läkare. Efter avslutad patologidiagnos kommer en del av den kvarvarande paraffininbäddade vävnaden att användas för denna studie. Rollen för proteiner involverade i diabetisk nefropati, VEGF-signalering och tenascin kommer att studeras genom immunhistokemi och närhetslänksanalys. Urin och plasma kommer att samlas in före njurbiopsi för att mäta proteinkoncentrationen av potentiellt användbara biomarkörer för diabetisk nefropati; VEGF- och tenascinnivåer kommer att kvantifieras. Patienterna kommer att informeras och undertecknat samtycke kommer att krävas.

Blodsockret kommer att mätas med blodsockermätaren och teststickan. Glykosylerat hemoglobin A1c och mikroalbuminuri (albumin/kreatinin i punkturin) kommer att kvantifieras med hjälp av den bärbara maskinen (Siemens).

Under fastande tillstånd kommer utredarna att överväga normala blodsockervärden <99 mg%, pre-diabetes mellan 100 och 125 mg% och diabetes ≥126 mg%. Under icke-fastande tillstånd kommer värden på blodsocker >200 mg% att betraktas som diabetes. Utredarna kommer att bedöma normala glykosylerade A1c-hemoglobinvärden <5,6 %, pre-diabetes mellan 5,7 och 6,4 % och diabetes ≥6,5 %.

Utredarna kommer att bedöma normala albuminurivärden av albumin/kreatininkvot <29mg/g, mikroalbuminurivärden mellan 30 och 299 mg/g och makroalbuminurivärden ≥300mg/g. Proteinuri kommer också att utvärderas med reaktiva urinremsor.

Vid inkonsekventa resultat eller värden utanför intervallet kommer analysen att upprepas i samma prov eller analyseras om med standardlaboratorieutrustning och -tekniker.

Utredarna kommer att betrakta diabetisk nefropati som ihållande proteinuri associerad med diabetisk retinopati och minskad endogen glomerulär filtrationshastighet (hos personer utan diagnos av andra njur- eller urinvägssjukdomar). Hos typ 1-diabetiker kommer diabetisk nefropati att diagnostiseras om diabeteshistorien är längre än 10 år före uppkomsten av proteinuri; hos diabetiker typ 2, proteinuri associerad med en minskad glomerulär filtrationshastighet vid diagnostidpunkten, kommer utredarna att bedöma diabetisk nefropati.

I alla paraffininbäddade njurprover kommer vi att mäta proteinuttrycket och lokaliseringen. Utredarna kommer att använda kit, primära och sekundära antikroppar kommersiellt tillgängliga för att utföra immunhistokemi och närhetslänkanalys. Utredarna kommer att utföra dessa experiment i samarbete med patologen.

Alla försökspersoner som rekryteras från den allmänna befolkningen kommer att identifieras med en unik kod. Siffror och versaler kommer att placeras i undersökningen och i urvalsetiketterna som M0001 (M: stad, nummer 0001: personnummer 0001). Data kommer att laddas upp och sparas i en säker databas. Utbildad personal kommer att ansvara för hanteringen av databasen. Utredarna kommer att övervaka datainmatningen. En utredare kommer minst en gång var sjätte månad att slumpmässigt välja 2 % undersökning och matcha den mot informationen som laddas upp i databasen. Vidare kommer utredarna att analysera och rapportera all insamlad data från undersökningarna även om de är ofullständiga genom att justera analysparametrarna för de ofullständiga.

Utredarna kommer att använda beskrivande statistiska verktyg för att beskriva grupper (medelvärde, standardavvikelse och standardfel eller median- och interkvartilintervall). För gruppjämförelser kommer oparade T-test, Mann Whitney eller Fishers test att användas. ANOVA, Kruskal Wallis och Chi Square test kommer att utföras för att jämföra omatchade grupper; för att kvantifiera sambandet mellan två variabler kommer Pearsons och Spearmans korrelationstest att användas. Enkla eller multipla regressioner kommer att övervägas för att förutsäga värde från variabler. P-värde <0,05 kommer att anses signifikant. Ett urval från den allmänna befolkningen beräknades med hänsyn till den vuxna befolkningen mellan 21-70 år i Ecuador.