Výplach děložní dutiny pro diagnostiku karcinomu vaječníků a vejcovodů - studie citlivosti a specificity (LUDOC II)

Epiteliální ovariální karcinom (EOC) je hlavní příčinou úmrtí mezi gynekologickými malignitami v západních civilizovaných zemích s odhadovanou prevalencí v Evropě a USA na 752 600 v roce 2007 a 59 828 úmrtí ročně. Léčba a přežití pacientů závisí především na stadiu onemocnění. Ze všech pacientů s EOC je pouze 25 % diagnostikováno v časném stadiu, zatímco nádor je omezen na pánev. V těchto případech je pětileté přežití 80 % až 90 % a onemocnění lze často vyléčit kombinací chirurgického zákroku a chemoterapie. Bohužel téměř 75 % postižených žen má v době diagnózy pokročilé stadium onemocnění s metastatickým rozšířením do břišní dutiny nebo do retroperitoneálních lymfatických uzlin; míra pětiletého přežití klesá u pokročilého onemocnění na 10–30 %, a to i přes maximální chirurgické úsilí a kombinovanou chemoterapii.

V současné době se moderní diferenciální diagnostika mezi maligními a benigními ovariálními patologiemi suspektními pro EOC spoléhá především na transvaginální ultrasonografii a měření sérového karcinomu antigenu (CA-125). Specifičnost těchto diagnostických nástrojů je však nízká a oba testy nejsou dostatečně účinné, aby spolehlivě odlišily benigní a maligní stavy. I na vysoce specializovaných jednotkách bude mít ze všech pacientek podstupujících operaci pro podezření na rakovinu vaječníků jen asi 20 % maligní onemocnění. Tato zjištění podtrhují potřebu nových diagnostických testů, schopných lépe rozlišit mezi benigními a maligními změnami vaječníků. To by možná mnohé pacientky zcela vyhnalo ze zbytečných operací a zlepšilo třídění pacientek se zhoubnými nádory vaječníků na vysoce specializovaná gynekologická onkologická pracoviště.

Slibný přístup ke zlepšení diferenciální diagnostiky suspektních ovariálních změn stanovili Paul Speiser a Robert Zeillinger (Skupina molekulární onkologie, Klinika obecné gynekologie a gynekologické onkologie, Lékařská univerzita Vídeň, Rakousko) (EK 1148/2011). Tento přístup se nazývá technika ALPINE (Austrian Lavage Procedure for the Detection of tubal Intraepitelial Neoplasms) (rukopis se připravuje). Zahrnuje výplach dutiny děložní a proximálních vejcovodů a následnou analýzu této výplachové tekutiny na přítomnost premaligních a maligních buněk.

Pro principiální důkaz, že nádorové buňky se vylučují z rakoviny vaječníků a lze je nalézt ve výplachech dutiny děložní, byly odebrány výplachy dělohy před chirurgickým zákrokem pro podezření na malignitu vaječníků na pracovišti výzkumníků a na Katolické univerzitě v Leuven, oddělení porodnictví a gynekologie. Po potvrzení malignity byly v nádorové tkáni stanoveny genetické změny v genu TP53 a KRAS. V souboru 9 pacientek s epiteliálním karcinomem ovaria (EOC) a 1 ovariální metastázou karcinomu signet ringu byla přítomnost těchto genetických změn vyšetřena ve vzorcích laváže pomocí digitální kapénkové PCR (ddPCR). V nádorové tkáni těchto pacientů bylo identifikováno 10 genetických změn a 9/10 (90 %) těchto změn bylo detekováno i v odpovídajícím vzorku z laváže. Míra mutací byla u EOC pacientů v rozmezí 0,01 % až 39,65 %. Dále byl zaveden filtrační přístup následovaný imunofluorescenčním barvením p53, který potvrdil přítomnost nádorových buněk ve vzorku výplachu jednoho dalšího pacienta.

V dalším kroku byly analyzovány lavážní vzorky 22 pacientek s karcinomem vaječníků a případně odpovídající nádorová tkáň pomocí hlubokého sekvenování skupinou Berta Vogelsteina (Johns Hopkins University, Baltimore, USA). Přítomnost genetických změn, které svědčí pro rakovinu vaječníků, mohla být potvrzena v 16/22 (72,7 %) lavážních vzorcích. Z 18 pacientů byly k dispozici odpovídající nádorové tkáně vykazující stejnou mutaci.

Tyto výsledky jsou důkazem, že buňky rakoviny vaječníků se vylučují do vejcovodů a děložní dutiny a mohou být odebrány naší technikou ALPINE. Skutečnost, že buňky ovariálního karcinomu byly detekovány s vysokou citlivostí v laváži dutiny děložní a proximálních vejcovodů, ukazuje, že tento přístup má velký potenciál v diferenciální diagnostice ovariálních mas.