Płukanie jamy macicy w diagnostyce raka jajnika i jajowodu – badanie czułości i swoistości (LUDOC II)

Nabłonkowy rak jajnika (EOC) jest główną przyczyną zgonów wśród nowotworów ginekologicznych w cywilizowanych krajach zachodnich, z szacowaną częstością występowania w Europie i Stanach Zjednoczonych na 752 600 w 2007 r. i 59 828 zgonów rocznie. Leczenie i przeżycie chorych zależą przede wszystkim od stopnia zaawansowania choroby. Spośród wszystkich pacjentów z EOC tylko 25% jest diagnozowanych we wczesnym stadium, gdy guz jest ograniczony do miednicy. W takich przypadkach pięcioletni wskaźnik przeżycia wynosi od 80% do 90%, a chorobę często można wyleczyć przez połączenie operacji i chemioterapii. Niestety, prawie 75% kobiet dotkniętych chorobą ma zaawansowaną postać choroby z przerzutami do jamy brzusznej lub węzłów chłonnych zaotrzewnowych w momencie rozpoznania; pięcioletnie przeżycia spadają do 10-30% w przypadku zaawansowanej choroby, pomimo maksymalnego wysiłku chirurgicznego i chemioterapii skojarzonej.

Obecnie najnowocześniejsza diagnostyka różnicowa między złośliwymi i łagodnymi patologiami jajnika podejrzanymi o EOC opiera się głównie na ultrasonografii przezpochwowej i pomiarach antygenu raka w surowicy (CA-125). Specyficzność tych narzędzi diagnostycznych jest jednak niska, a oba testy nie są wystarczająco skuteczne, aby wiarygodnie odróżnić stany łagodne od złośliwych. Nawet w jednostkach wysokospecjalistycznych spośród wszystkich pacjentek poddawanych zabiegom chirurgicznym z podejrzeniem raka jajnika tylko około 20% będzie miało chorobę nowotworową. Odkrycia te podkreślają potrzebę opracowania nowych testów diagnostycznych, zdolnych do lepszego różnicowania łagodnych i złośliwych zmian w jajnikach. To prawdopodobnie całkowicie odsunęłoby wielu pacjentów od niepotrzebnych operacji i usprawniłoby segregację pacjentek ze złośliwymi guzami jajnika na wysokospecjalistyczne oddziały ginekologii onkologicznej.

Obiecujące podejście do poprawy diagnostyki różnicowej podejrzanych zmian jajników zostało opracowane przez Paula Speisera i Roberta Zeillingera (Molecular Oncology Group, Department of General Gynecology and Gynaecologic Oncology, Medical University of Vienna, Austria) (EK 1148/2011). To podejście nazywa się techniką ALPINE (austriacka procedura płukania do wykrywania śródnabłonkowych nowotworów jajowodów) (rękopis w przygotowaniu). Obejmuje płukanie jamy macicy i proksymalnych jajowodów, a następnie analizę tego płynu popłuczynowego na obecność komórek przednowotworowych i złośliwych.

W celu potwierdzenia zasady, że komórki nowotworowe są usuwane z raka jajnika i można je znaleźć w popłuczynach jamy macicy, popłuczyny macicy pobrano przed interwencją chirurgiczną z powodu podejrzenia nowotworu złośliwego jajnika w instytucji badaczy oraz na Katolickim Uniwersytecie w Leuven, Wydział Położnictwa i Ginekologii. Po potwierdzeniu złośliwości określono zmiany genetyczne w genie TP53 i KRAS w tkance nowotworowej. W zestawie 9 pacjentek z nabłonkowym rakiem jajnika (EOC) i 1 jajnika z przerzutami raka sygnetu, obecność tych zmian genetycznych zbadano w próbkach popłuczyn, stosując cyfrowy PCR kropelkowy (ddPCR). W tkance nowotworowej tych pacjentów zidentyfikowano dziesięć zmian genetycznych, a 9/10 (90%) z tych zmian wykryto również w odpowiedniej próbce popłuczyn. Wskaźniki mutacji mieściły się w zakresie od 0,01% do 39,65% u pacjentów z EOC. Ponadto ustalono podejście filtracyjne, a następnie barwienie immunofluorescencyjne p53, potwierdzając obecność komórek nowotworowych w próbce popłuczyn jednego dodatkowego pacjenta.

W następnym etapie próbki popłuczyn od 22 pacjentek z rakiem jajnika i, jeśli ma to zastosowanie, odpowiednią tkankę nowotworową zostały przeanalizowane poprzez głębokie sekwencjonowanie przez grupę Berta Vogelsteina (Johns Hopkins University, Baltimore, USA). Obecność zmian genetycznych wskazujących na raka jajnika można było potwierdzić w 16/22 (72,7%) próbkach popłuczyn. Spośród 18 pacjentów dostępne były odpowiednie tkanki nowotworowe, wykazujące tę samą mutację.

Wyniki te są dowodem na to, że komórki raka jajnika są wydalane do jajowodów i jamy macicy i można je pobrać za pomocą naszej techniki ALPINE. Fakt, że komórki raka jajnika wykrywano z dużą czułością w popłuczynach z jamy macicy i jajowodów proksymalnych, świadczy o dużym potencjale tego podejścia w diagnostyce różnicowej guzów jajnika.