Sköljning av livmoderhålan för diagnos av ovarie- och tubalkarcinom - Studie av känslighet och specificitet (LUDOC II)

Epitelial ovariecancer (EOC) är den vanligaste dödsorsaken bland gynekologiska maligniteter i västerländska civiliserade länder, med en uppskattad prevalens i Europa och USA på 752 600 under 2007 och 59 828 dödsfall årligen. Behandling och överlevnad av patienterna beror i första hand på sjukdomsstadiet. Av alla EOC-patienter diagnostiseras endast 25% i ett tidigt skede medan tumören är begränsad till bäckenet. I dessa fall är femårsöverlevnaden 80 % till 90 % och sjukdomen kan ofta botas genom en kombination av kirurgi och kemoterapi. Tyvärr har nästan 75 % av de drabbade kvinnorna sjukdomar i framskridet stadium med metastaserad spridning i bukhålan eller till retroperitoneala lymfkörtlar vid tidpunkten för diagnos; femårsöverlevnaden sjunker till 10%-30% för avancerad sjukdom, trots maximal kirurgisk ansträngning och kombinationskemoterapi.

För närvarande bygger den senaste differentialdiagnosen mellan maligna och benigna ovariepatologier som är misstänkta för EOC huvudsakligen på transvaginal ultraljud och mätningar av serumcancerantigen (CA-125). Specificiteten hos dessa diagnostiska verktyg är dock låg, och båda testerna är inte tillräckligt effektiva för att tillförlitligt skilja mellan benigna och maligna tillstånd. Även på högspecialiserade enheter kommer endast cirka 20 % av alla patienter som opereras för misstänkt äggstockscancer att ha en malign sjukdom. Dessa fynd understryker behovet av nya diagnostiska tester, som bättre kan skilja mellan benigna och maligna äggstocksförändringar. Detta skulle möjligen leda många patienter från onödiga operationer helt och hållet och förbättra triaget av patienter med maligna äggstockstumörer till högt specialiserade gynekologiska onkologiska enheter.

Ett lovande tillvägagångssätt för förbättring av differentialdiagnos av misstänkta äggstocksförändringar har fastställts av Paul Speiser och Robert Zeillinger (Molecular Oncology Group, Institutionen för allmän gynekologi och gynekologisk onkologi, Medical University of Vienna, Österrike) (EK 1148/2011). Detta tillvägagångssätt kallas ALPINE-tekniken (österrikisk sköljningsprocedur för detektion av tubala intraepitelial neoplasmer) (manuskript under förberedelse). Det inkluderar en sköljning av livmoderhålan och proximala äggledare och efterföljande analys av denna sköljvätska för förekomsten av premaligna och maligna celler.

För principbeviset att tumörceller utsöndras från äggstockscancer och kan hittas i sköljningar av livmoderhålan, samlades livmodersköljningar in före ett kirurgiskt ingrepp för misstänkt ovariemalignitet vid utredarnas institution och vid katolska universitetet i Leuven, avdelningen för obstetrik och gynekologi. Efter att malignitet bekräftats, bestämdes genetiska förändringar i TP53- och KRAS-genen i tumörvävnad. I en uppsättning av 9 patienter med epitelial äggstockscancer (EOC) och 1 äggstocksmetastaser av ett signetringkarcinom undersöktes förekomsten av dessa genetiska förändringar i sköljprover med användning av digital droppe PCR (ddPCR). Tio genetiska förändringar identifierades i tumörvävnaden hos dessa patienter och 9/10 (90%) av dessa förändringar upptäcktes också i motsvarande sköljprov. Mutationsfrekvensen låg i intervallet mellan 0,01 % och 39,65 % hos EOC-patienter. Vidare etablerades ett filtertillvägagångssätt, följt av p53-immunfluorescensfärgning, vilket bekräftar närvaron av tumörceller i sköljprovet från ytterligare en patient.

I ett nästa steg analyserades sköljprover av 22 äggstockscancerpatienter, och om tillämpligt motsvarande tumörvävnad, genom djupsekvensering av gruppen Bert Vogelstein (Johns Hopkins University, Baltimore, USA). Förekomsten av genetiska förändringar, som tyder på äggstockscancer, kunde bekräftas i 16/22 (72,7 %) sköljprover. Av 18 patienter fanns motsvarande tumörvävnader tillgängliga, som visade samma mutation.

Dessa resultat är bevis på att äggstockscancerceller fälls in i äggledarna och livmoderhålan och kan samlas in genom vår ALPIN-teknik. Det faktum att äggstockscancerceller upptäcktes med hög känslighet vid sköljning av livmoderhålan och proximala rör visar att detta tillvägagångssätt har en stor potential vid differentialdiagnos av äggstocksmassor.