Lavaggio della Cavità Uterina per la Diagnosi del Carcinoma Ovarico e Tubarico - Studio della Sensibilità e Specificità (LUDOC II)

Il carcinoma ovarico epiteliale (EOC) è la principale causa di morte tra le neoplasie ginecologiche nei paesi civilizzati occidentali, con una prevalenza stimata in Europa e negli Stati Uniti di 752.600 nel 2007 e 59.828 decessi all'anno. Il trattamento e la sopravvivenza dei pazienti dipendono principalmente dallo stadio della malattia. Di tutti i pazienti EOC solo il 25% viene diagnosticato in una fase precoce mentre il tumore è confinato al bacino. In questi casi il tasso di sopravvivenza a cinque anni è compreso tra l'80% e il 90% e la malattia può spesso essere curata con la combinazione di chirurgia e chemioterapia. Purtroppo, quasi il 75% delle donne colpite ha una malattia in stadio avanzato con diffusione metastatica in tutta la cavità addominale o ai linfonodi retroperitoneali al momento della diagnosi; i tassi di sopravvivenza a cinque anni scendono al 10%-30% per la malattia avanzata, nonostante il massimo sforzo chirurgico e la chemioterapia combinata.

Attualmente, la diagnosi differenziale allo stato dell'arte tra patologie ovariche maligne e benigne sospette per EOC si basa prevalentemente sull'ecografia transvaginale e sulle misurazioni dell'antigene del cancro sierico (CA-125). La specificità di questi strumenti diagnostici è tuttavia bassa ed entrambi i test non sono sufficientemente efficaci per distinguere in modo affidabile tra condizioni benigne e maligne. Anche in unità altamente specializzate, di tutte le pazienti sottoposte a intervento chirurgico per sospetto carcinoma ovarico solo il 20% circa avrà una malattia maligna. Questi risultati sottolineano la necessità di nuovi test diagnostici, in grado di differenziare meglio tra alterazioni ovariche benigne e maligne. Ciò potrebbe liberare completamente molte pazienti da interventi chirurgici non necessari e migliorare il triage di pazienti con tumori ovarici maligni a unità di oncologia ginecologica altamente specializzate.

Un approccio promettente per il miglioramento della diagnosi differenziale dei cambiamenti ovarici sospetti è stato stabilito da Paul Speiser e Robert Zeillinger (Molecular Oncology Group, Department of General Gynecology and Gynaecologic Oncology, Medical University of Vienna, Austria) (EK 1148/2011). Questo approccio è chiamato tecnica ALPINE (Austrian Lavage Procedure for the Detection of tubal Intraepithelial Neoplasms) (manoscritto in preparazione). Include un lavaggio della cavità uterina e delle tube prossimali di Falloppio e la successiva analisi di questo fluido di lavaggio per la presenza di cellule premaligne e maligne.

Per la prova di principio che le cellule tumorali si liberano dal cancro ovarico e possono essere trovate nei lavaggi della cavità uterina, sono stati raccolti lavaggi uterini prima di un intervento chirurgico per sospetto tumore ovarico presso l'istituto degli investigatori e presso l'Università Cattolica di Leuven, Dipartimento di Ostetricia e Ginecologia. Dopo che la malignità è stata confermata, i cambiamenti genetici nel gene TP53 e KRAS sono stati determinati nel tessuto tumorale. In un set di 9 pazienti con carcinoma ovarico epiteliale (EOC) e 1 metastasi ovarica di un carcinoma ad anello con castone, la presenza di questi cambiamenti genetici è stata esaminata in campioni di lavaggio, utilizzando la PCR con goccioline digitali (ddPCR). Dieci cambiamenti genetici sono stati identificati nel tessuto tumorale di questi pazienti e 9/10 (90%) di questi cambiamenti sono stati rilevati anche nel corrispondente campione di lavaggio. I tassi di mutazione erano compresi tra lo 0,01% e il 39,65% nei pazienti EOC. Inoltre, è stato stabilito un approccio di filtro, seguito dalla colorazione con immunofluorescenza p53, confermando la presenza di cellule tumorali nel campione di lavaggio di un altro paziente.

In una fase successiva, campioni di lavaggio di 22 pazienti con carcinoma ovarico e, se applicabile, tessuto tumorale corrispondente, sono stati analizzati mediante sequenziamento profondo dal gruppo di Bert Vogelstein (Johns Hopkins University, Baltimora, USA). La presenza di alterazioni genetiche, indicative di carcinoma ovarico, potrebbe essere confermata in 16/22 (72,7%) campioni di lavaggio. Di 18 pazienti, erano disponibili tessuti tumorali corrispondenti, che mostravano la stessa mutazione.

Questi risultati sono la prova che le cellule tumorali ovariche vengono versate nelle tube di Falloppio e nella cavità uterina e possono essere raccolte attraverso la nostra tecnica ALPINE. Il fatto che le cellule tumorali ovariche siano state rilevate con elevata sensibilità nel lavaggio della cavità uterina e delle tube prossimali dimostra che questo approccio ha un grande potenziale nella diagnosi differenziale delle masse ovariche.