Sledování šíření melanomových buněk ve zdravých tkáních (DISSEMELA)

V západním světě výskyt melanomu za posledních 50 let neustále stoupá a v současnosti je uváděn jako nejčastější nádor u žen ve věku 20 - 29 let. Geny BRAF, NRAS a c-kit hrají důležitou roli v buněčné proliferaci a u melanomu jsou velmi často mutovány. Navzdory nedávným terapeutickým průlomům dosaženým použitím nových léků zůstává metastatický melanom stále život ohrožujícím onemocněním. Jedna z hlavních otázek u melanomu se týká počátečních kroků vedoucích k metastatickému šíření, přičemž lepší porozumění je klíčovým krokem k jeho prevenci a identifikaci nových molekulárních mechanismů implementovaných pro zlepšení našeho terapeutického arzenálu.

Navrhovaná práce si klade za cíl studovat hypotézu časného šíření u lidského melanomu pomocí nedávno vyvinutých výkonných technik e-ice cold PCR a také klasické imunohistochemie. K tomu vědci využijí skutečnosti, že léčba melanomu spočívá na sekundární excizi normální peritumorální kůže a sentinelové lymfatické uzliny. Tato peritumorální tkáň je velká (měří 2 až 6 cm v průměru), obsahuje lymfatická vlákna v hypodermis, tkáň, která je považována za hostitele metastatické cesty melanocytů, a zůstává částečně dostupná pro analýzu.

Budou nalezeni všichni pacienti s melanomem stadia Ib a II sledovaní v pařížské kohortě Melan-cohort, Cochin Hospital a Gustave Roussy Institute v letech 2005 až 2009. PCR analýza bude provedena na DNA extrahované z parafínem zalitých řezů primárních nádorů. Budou vybráni pacienti, kteří vykazují mutace v genech BRAF (BRAFV600E, BRAFV600K), NRAS (kodon 61) nebo c-kit. Budou získány archivní tkáně zalité v parafínu ze zdravé perilezionální kůže i ze zdravých sentinelových lymfatických uzlin. Pyrosekvenování a e-ice cold PCR zacílení na mutace výše uvedených genů v jejich obvyklých pozicích bude provedeno na DNA extrahované z těchto vzorků. Imunofluorescenční anti-BRAFV600E nebo protinádorové/iniciační/kmenové buňky budou provedeny na stejných tkáních. Tyto jednoduché techniky otestují – za použití citlivého nástroje molekulární biologie – zda ​​u lidí s melanomy dochází k časnému šíření melanomových buněk v histopatologicky zdravé sentinelové lymfatické uzlině a peritumorální kůži. Přítomnost těchto klonálních buněk v těchto zdravých tkáních bude korelována s přežitím pacientů po 5 letech a umožní vývoj nového terapeutického sledování a strategií.