Tracering van de verspreiding van melanoomcellen in gezonde weefsels (DISSEMELA)

In de westerse wereld is de incidentie van melanoom de afgelopen 50 jaar constant gestegen en wordt het momenteel gerapporteerd als de meest voorkomende tumor bij vrouwen van 20 tot 29 jaar oud. BRAF-, NRAS- en c-kit-genen spelen een belangrijke rol bij celproliferatie en worden zeer frequent gemuteerd bij melanoom. Ondanks de recente therapeutische doorbraken die zijn bereikt met het gebruik van nieuwe medicijnen, blijft uitgezaaid melanoom nog steeds een levensbedreigende ziekte. Een van de belangrijkste vragen bij melanoom betreft de eerste stappen die leiden tot metastatische verspreiding, waarbij een beter begrip een belangrijke stap is naar de preventie ervan en de identificatie van nieuwe moleculaire mechanismen die van toepassing zijn op de verbetering van ons therapeutisch arsenaal.

Het voorgestelde werk heeft tot doel de hypothese van vroege verspreiding in menselijk melanoom te bestuderen met behulp van de recent ontwikkelde krachtige technieken van e-ice cold PCR, evenals klassieke immunohistochemie. Om dit te doen, zullen onderzoekers profiteren van het feit dat de behandeling van melanoom berust op een secundaire excisie van normale peritumorale huid en schildwachtklier. Dit peritumorale weefsel is groot (met een diameter van 2 tot 6 cm), bevat lymfevaten in de hypodermis, het weefsel waarvan wordt aangenomen dat het de metastatische route van melanocyten herbergt, en blijft gedeeltelijk beschikbaar voor analyse.

Alle patiënten met stadium Ib en II melanoom die tussen 2005 en 2009 in het parijse cohort Melan-cohort, Cochin Hospital en Gustave Roussy Institute zijn gevolgd, worden teruggevonden. Er zal een PCR-analyse worden uitgevoerd op DNA dat is geëxtraheerd uit in paraffine ingebedde secties van primaire tumoren. Patiënten die mutaties vertonen in BRAF- (BRAFV600E, BRAFV600K), NRAS- (codon 61) of c-kit-genen zullen worden geselecteerd. De gearchiveerde in paraffine ingebedde weefsels van gezonde perilesionale huid en van gezonde schildwachtlymfeklieren zullen worden verkregen. Pyrosequencing en e-ice cold PCR gericht op de mutaties van de bovenstaande genen op hun gebruikelijke posities zullen worden uitgevoerd op DNA dat uit deze monsters is geëxtraheerd. Immunofluorescentie anti-BRAFV600E of antitumorale/initiërende/stamcellen zullen op dezelfde weefsels worden gedaan. Deze eenvoudige technieken zullen -met behulp van een gevoelig moleculairbiologisch hulpmiddel- testen of er bij mensen met melanomen vroege verspreiding van melanoomcellen is in histopathologisch gezonde schildwachtlymfeklieren en peritumorale huid. De aanwezigheid van deze klonale cellen in deze gezonde weefsels zal gecorreleerd zijn met de overleving van de patiënten na 5 jaar en zal de ontwikkeling van nieuwe therapeutische follow-up en strategieën mogelijk maken.