Melanoomasolujen leviämisen jäljittäminen terveissä kudoksissa (DISSEMELA)

Länsimaissa melanooman ilmaantuvuus on jatkuvasti noussut viimeisen 50 vuoden ajan, ja se on tällä hetkellä raportoitu yleisimmäksi kasvaimeksi 20-29-vuotiailla naisilla. BRAF-, NRAS- ja c-kit-geeneillä on tärkeä rooli solujen lisääntymisessä, ja ne mutatoituvat erittäin usein melanoomassa. Huolimatta viimeaikaisista terapeuttisista läpimurroista, jotka on saavutettu uusien lääkkeiden käytöllä, metastaattinen melanooma on edelleen henkeä uhkaava sairaus. Yksi melanooman tärkeimmistä kysymyksistä koskee alkuvaiheita, jotka johtavat metastaattisen leviämiseen, parempi ymmärtäminen on keskeinen askel sen ehkäisyssä ja uusien molekyylimekanismien tunnistaminen, jotka auttavat parantamaan terapeuttista arsenaaliamme.

Ehdotetun työn tavoitteena on tutkia hypoteesia ihmisen melanooman varhaisesta leviämisestä käyttämällä äskettäin kehitettyjä tehokkaita e-jääkylmän PCR-tekniikoita sekä klassista immunohistokemiaa. Tätä varten tutkijat käyttävät hyväkseen sitä tosiasiaa, että melanooman hoito perustuu normaalin peritumoraalisen ihon ja vartioimusolmukkeen toissijaiseen leikkaukseen. Tämä peritumoraalinen kudos on suuri (halkaisijaltaan 2–6 cm), sisältää imusolmukkeita hypodermissa, kudoksessa, jonka katsotaan isännöivän melanosyyttien etäpesäkkeitä, ja se on osittain käytettävissä analysoitavaksi.

Kaikki potilaat, joilla on vaiheiden Ib ja II melanooma, joita seurattiin pariisilaisessa kohortissa Melan-cohort, Cochin Hospital ja Gustave Roussy Institute, mukaan lukien vuosina 2005–2009, löydetään. PCR-analyysi tehdään DNA:lle, joka on uutettu primaaristen kasvainten parafiiniin upotetuista osista. Potilaat, joilla on mutaatioita BRAF- (BRAFV600E, BRAFV600K), NRAS (kodoni 61) tai c-kit-geeneissä, valitaan. Arkistoidut parafiiniin upotetut kudokset saadaan terveestä perilesionaalisesta ihosta sekä terveistä vartioimusolmukkeista. Pyrosekvensointi ja e-jääkylmä PCR, joka kohdistuu yllä olevien geenien mutaatioihin niiden tavallisissa paikoissa, tehdään näistä näytteistä erotetulle DNA:lle. Immunofluoresenssi anti-BRAFV600E tai antituumori/aloitus/kantasolut tehdään samoihin kudoksiin. Nämä yksinkertaiset tekniikat testaavat herkkää molekyylibiologian työkalua käyttäen, onko melanoomaa sairastavilla ihmisillä melanoomasolujen varhaista leviämistä histopatologisesti terveissä vartioimusolmukkeissa ja peritumoraalisessa ihossa. Näiden klonaalisten solujen läsnäolo näissä terveissä kudoksissa korreloi potilaiden eloonjäämiseen viiden vuoden kuluttua ja mahdollistaa uusien terapeuttisten seurannan ja strategioiden kehittämisen.