Seguimiento de la diseminación de células de melanoma en tejidos sanos (DISSEMELA)

En el mundo occidental, la incidencia de melanoma ha aumentado constantemente durante los últimos 50 años, y actualmente se informa como el tumor más frecuente en mujeres de 20 a 29 años. Los genes BRAF, NRAS y c-kit juegan un papel importante en la proliferación celular y están mutados con una frecuencia muy alta en el melanoma. A pesar de los recientes avances terapéuticos obtenidos con el uso de nuevos fármacos, el melanoma metastásico sigue siendo una enfermedad potencialmente mortal. Una de las principales cuestiones en el melanoma se refiere a los pasos iniciales que conducen a la diseminación metastásica, siendo una mejor comprensión un paso clave para su prevención y la identificación de nuevos mecanismos moleculares que se implementen para mejorar nuestro arsenal terapéutico.

El trabajo propuesto tiene como objetivo estudiar la hipótesis de la propagación temprana en el melanoma humano utilizando las potentes técnicas recientemente desarrolladas de PCR en frío con hielo, así como la inmunohistoquímica clásica. Para ello, los investigadores aprovecharán el hecho de que el tratamiento del melanoma se basa en una escisión secundaria de la piel peritumoral normal y del ganglio linfático centinela. Este tejido peritumoral es grande (de 2 a 6 cm de diámetro), contiene linfáticos en la hipodermis, tejido que se considera que alberga la ruta metastásica de los melanocitos y permanece parcialmente disponible para el análisis.

Se encontrarán todos los pacientes con melanoma en estadio Ib y II seguidos en la cohorte parisina Melan-cohort, el Hospital Cochin y el Instituto Gustave Roussy incluidos entre 2005 y 2009. Se realizará un análisis de PCR en el ADN extraído de secciones incluidas en parafina de tumores primarios. Se seleccionarán pacientes que muestren mutaciones en los genes BRAF (BRAFV600E, BRAFV600K), NRAS (codón 61) o c-kit. Se obtendrán los tejidos embebidos en parafina de archivo de la piel perilesional sana, así como de los ganglios linfáticos centinela sanos. La pirosecuenciación y la PCR en frío con hielo electrónico dirigidas a las mutaciones de los genes anteriores en sus posiciones habituales se realizarán en el ADN extraído de estos especímenes. La inmunofluorescencia anti-BRAFV600E o antitumoral/iniciadora/células madre se realizará en los mismos tejidos. Estas sencillas técnicas permitirán comprobar -utilizando una sensible herramienta de biología molecular- si en humanos con melanomas existe una diseminación temprana de células de melanoma en el ganglio centinela sano histopatológicamente y en la piel peritumoral. La presencia de estas células clonales en estos tejidos sanos se correlacionará con la supervivencia de los pacientes a los 5 años y permitirá el desarrollo de nuevas estrategias y seguimiento terapéutico.