Traçage de la dissémination des cellules de mélanome dans les tissus sains (DISSEMELA)

Dans le monde occidental, l'incidence du mélanome n'a cessé d'augmenter au cours des 50 dernières années et il est actuellement signalé comme la tumeur la plus fréquente chez les femmes de 20 à 29 ans. Les gènes BRAF, NRAS et c-kit jouent un rôle important dans la prolifération cellulaire et sont mutés à très haute fréquence dans le mélanome. Malgré les avancées thérapeutiques récentes obtenues grâce à l'utilisation de nouveaux médicaments, le mélanome métastatique reste une maladie potentiellement mortelle. L'une des principales questions du mélanome concerne les étapes initiales menant à la propagation métastatique, une meilleure compréhension étant une étape clé pour sa prévention et l'identification de nouveaux mécanismes moléculaires pouvant être mis en œuvre pour l'amélioration de notre arsenal thérapeutique.

Le travail proposé vise à étudier l'hypothèse d'une propagation précoce dans le mélanome humain en utilisant les techniques puissantes récemment développées de PCR e-ice cold, ainsi que l'immunohistochimie classique. Pour ce faire, les chercheurs tireront parti du fait que le traitement du mélanome repose sur une excision secondaire de la peau péritumorale normale et du ganglion sentinelle. Ce tissu péritumoral est volumineux (mesurant 2 à 6 cm de diamètre), contient des lymphatiques dans l'hypoderme, tissu considéré comme hébergeant la voie métastatique des mélanocytes et reste partiellement disponible pour l'analyse.

Tous les patients atteints de mélanome de stade Ib et II suivis dans la cohorte parisienne Mélan-cohorte, Hôpital Cochin et Institut Gustave Roussy inclus entre 2005 et 2009 seront retrouvés. Une analyse PCR sera effectuée sur l'ADN extrait de coupes incluses en paraffine de tumeurs primaires. Les patients qui présentent des mutations des gènes BRAF (BRAFV600E, BRAFV600K), NRAS (codon 61) ou c-kit seront sélectionnés. Les tissus d'archives inclus dans la paraffine de la peau périlésionnelle saine ainsi que des ganglions lymphatiques sentinelles sains seront obtenus. Un pyroséquençage et une e-ice cold PCR ciblant les mutations des gènes ci-dessus à leurs positions habituelles seront effectués sur l'ADN extrait de ces échantillons. L'immunofluorescence anti-BRAFV600E ou anti cellules tumorales/initiatrices/souches sera effectuée sur les mêmes tissus. Ces techniques simples permettront de tester - à l'aide d'un outil de biologie moléculaire sensible - si chez l'homme atteint de mélanomes, il existe une dissémination précoce des cellules de mélanome dans le ganglion sentinelle sain histopathologique et la peau péritumorale. La présence de ces cellules clonales dans ces tissus sains sera corrélée à la survie des patients après 5 ans et permettra le développement de nouveaux suivis et stratégies thérapeutiques.