Spore spredning av melanomceller i sunt vev (DISSEMELA)

I den vestlige verden har forekomsten av melanom økt konstant de siste 50 årene, og den er for tiden rapportert som den hyppigste svulsten hos 20 - 29 år gamle kvinner. BRAF-, NRAS- og c-kit-gener spiller en viktig rolle i celleproliferasjon og muteres med svært høy frekvens ved melanom. Til tross for de nylige terapeutiske gjennombruddene oppnådd med bruk av nye medisiner, er metastatisk melanom fortsatt en livstruende sykdom. Et av hovedspørsmålene i melanom gjelder de første trinnene som fører til metastatisk spredning, en bedre forståelse er et nøkkeltrinn i forebyggingen av det og identifiseringen av nye molekylære mekanismer som kan implementeres for å forbedre vårt terapeutiske arsenal.

Det foreslåtte arbeidet tar sikte på å studere hypotesen om tidlig spredning i humant melanom ved å bruke de nylig utviklede kraftige teknikkene for e-iskold PCR, samt klassisk immunhistokjemi. For å gjøre det, vil etterforskere dra nytte av det faktum at behandling av melanom er avhengig av en sekundær eksisjon av normal peritumoral hud og vaktpostlymfeknute. Dette peritumorale vevet er stort (måler 2 til 6 cm i diameter), inneholder lymfeceller i hypodermis, vevet som anses å være vert for den metastatiske ruten til melanocytter og forblir delvis tilgjengelig for analyse.

Alle pasienter med stadium Ib og II melanom fulgt i den parisiske kohorten Melan-kohorten, Cochin Hospital og Gustave Roussy Institute inkludert mellom 2005 og 2009 vil bli funnet. En PCR-analyse vil bli gjort på DNA ekstrahert fra parafininnstøpte seksjoner av primære svulster. Pasienter som viser mutasjoner i BRAF (BRAFV600E, BRAFV600K), NRAS (kodon 61) eller c-kit gener vil bli valgt. Det arkiverte parafininnstøpte vevet fra sunn perilesjonell hud så vel som fra sunne vaktpostlymfeknuter vil bli oppnådd. Pyrosekvensering og e-iskold PCR rettet mot mutasjonene av genene ovenfor i deres vanlige posisjoner vil bli utført på DNA ekstrahert fra disse prøvene. Immunfluorescens anti-BRAFV600E eller antitumor/initierende/stamceller vil bli gjort på samme vev. Disse enkle teknikkene vil teste -ved hjelp av et sensitivt molekylærbiologisk verktøy - om det er tidlig spredning av melanomceller hos mennesker med melanom i histopatologisk sunn vaktpostlymfeknute og peritumoral hud. Tilstedeværelsen av disse klonale cellene i disse friske vevene vil være korrelert til pasientenes overlevelse etter 5 år og vil tillate utvikling av ny terapeutisk oppfølging og strategier.