Sporing af spredning af melanomceller i sundt væv (DISSEMELA)

I den vestlige verden er forekomsten af ​​melanom konstant steget de sidste 50 år, og det er i øjeblikket rapporteret som den hyppigste tumor hos 20 - 29 årige kvinder. BRAF-, NRAS- og c-kit-gener spiller en vigtig rolle i celleproliferation og muteres med meget høj frekvens ved melanom. På trods af de nylige terapeutiske gennembrud opnået med brugen af ​​nye lægemidler, er metastatisk melanom stadig en livstruende sygdom. Et af hovedspørgsmålene i melanom vedrører de indledende trin, der fører til metastatisk spredning, en bedre forståelse er et nøgletrin til dets forebyggelse og identifikation af nye molekylære mekanismer, der implementerer til forbedringen af ​​vores terapeutiske arsenal.

Det foreslåede arbejde sigter mod at studere hypotesen om tidlig spredning i humant melanom ved hjælp af de nyligt udviklede kraftfulde teknikker til e-iskold PCR, såvel som klassisk immunhistokemi. For at gøre det vil efterforskere drage fordel af det faktum, at behandling af melanom er afhængig af en sekundær udskæring af normal peritumoral hud og vagtpostlymfeknude. Dette peritumorale væv er stort (måler 2 til 6 cm i diameter), indeholder lymfevæv i hypodermis, det væv, der anses for at være vært for den metastatiske vej af melanocytter og forbliver delvist tilgængeligt til analyse.

Alle patienter med stadium Ib og II melanom fulgt i den parisiske kohorte Melan-kohorte, Cochin Hospital og Gustave Roussy Institute inkluderet mellem 2005 og 2009, vil blive fundet. En PCR-analyse vil blive udført på DNA ekstraheret fra paraffinindlejrede sektioner af primære tumorer. Patienter, der viser mutationer i BRAF (BRAFV600E, BRAFV600K), NRAS (codon 61) eller c-kit gener, vil blive udvalgt. Det arkiverede paraffinindlejrede væv fra sund perilesionel hud samt fra sunde sentinel-lymfeknuder vil blive opnået. Pyrosequencing og e-iskold PCR rettet mod mutationerne af ovennævnte gener i deres sædvanlige positioner vil blive udført på DNA ekstraheret fra disse prøver. Immunfluorescens anti-BRAFV600E eller antitumor/initierende/stamceller vil blive udført på samme væv. Disse enkle teknikker vil teste - ved hjælp af et følsomt molekylærbiologisk værktøj - om der er tidlig spredning af melanomceller hos mennesker med melanom i histopatologisk sunde sentinel-lymfeknuder og peritumoral hud. Tilstedeværelsen af ​​disse klonale celler i disse sunde væv vil være korreleret til patienternes overlevelse efter 5 år og vil muliggøre udvikling af ny terapeutisk opfølgning og strategier.