Spåra spridning av melanomceller i friska vävnader (DISSEMELA)

I västvärlden har incidensen av melanom konstant ökat under de senaste 50 åren, och det rapporteras för närvarande som den vanligaste tumören hos 20 - 29 år gamla kvinnor. BRAF, NRAS och c-kit gener spelar en viktig roll i cellproliferation och muteras med mycket hög frekvens vid melanom. Trots de senaste terapeutiska genombrotten som erhållits med användning av nya läkemedel, är metastaserande melanom fortfarande en livshotande sjukdom. En av huvudfrågorna inom melanom gäller de första stegen som leder till spridning av metastaser, en bättre förståelse är ett nyckelsteg för att förebygga detta och identifieringen av nya molekylära mekanismer som är implementerande för att förbättra vår terapeutiska arsenal.

Det föreslagna arbetet syftar till att studera hypotesen om tidig spridning i humant melanom med hjälp av de nyligen utvecklade kraftfulla teknikerna för e-iskall PCR, såväl som klassisk immunhistokemi. För att göra det kommer utredarna att dra fördel av det faktum att behandling av melanom bygger på en sekundär excision av normal peritumoral hud och sentinel lymfkörtel. Denna peritumorala vävnad är stor (mäter 2 till 6 cm i diameter), innehåller lymfatiska organ i hypodermis, den vävnad som anses vara värd för den metastatiska vägen för melanocyter och förblir delvis tillgänglig för analys.

Alla patienter med stadium Ib och II melanom följt i parisiska kohorten Melan-kohort, Cochin Hospital och Gustave Roussy Institute inkluderade mellan 2005 och 2009 kommer att hittas. En PCR-analys kommer att göras på DNA extraherat från paraffininbäddade sektioner av primära tumörer. Patienter som uppvisar mutationer i BRAF- (BRAFV600E, BRAFV600K), NRAS (kodon 61) eller c-kit-gener kommer att väljas ut. De arkiverade paraffininbäddade vävnaderna från frisk perilesionell hud såväl som från friska sentinellymfkörtlar kommer att erhållas. Pyrosequencing och e-ice cold PCR som riktar sig mot mutationerna av ovanstående gener i deras vanliga positioner kommer att göras på DNA extraherat från dessa prover. Immunfluorescens-anti-BRAFV600E eller antitumör-/initierande/stamceller kommer att göras på samma vävnader. Dessa enkla tekniker kommer att testa - med hjälp av ett känsligt molekylärbiologiskt verktyg - oavsett om det är hos människor med melanom, det finns tidig spridning av melanomceller i histopatologisk frisk vaktpostlymfkörtel och peritumoral hud. Närvaron av dessa klonala celler i dessa friska vävnader kommer att vara korrelerad till patienternas överlevnad efter 5 år och kommer att möjliggöra utvecklingen av nya terapeutiska uppföljningar och strategier.